定量分析LHON突变mtDNA拷贝数方法的建立与评价

发布时间：2022-12-22 23:52

　　目的:Leber遗传性视神经病变（Leber hereditary optic neuropathy,LHON）是一种发生于视神经的退行性疾病。在中国汉族人群中,其主要与三种线粒体DNA（mtDNA）突变:m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C相关。尽管有几种方法可以对这些突变进行基因分型,如:SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA测序等等,但由于费用昂贵、手续复杂、耗时长等因素,限制了其在临床推广使用。很少有针对LHON mtDNA三个突变位点的具备快速,低成本和易处理优势的定量方法的报道。因此,本研究诣在建立一种基于TaqMan小沟结合物（MGB）探针的荧光定量PCR（qPCR）方法,以对三个LHON mtDNA突变进行定性和定量分析。方法:1.针对中国汉族人群mtDNA的m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C 3个常见的突变位点分别构建相应的突变阳性对照标准品和阴性对照标准品。按照TaqMan-MGB探针qPCR引物探针设计原则分别针对LHON基因3种高频突变位点设计引物和探针。2.优化引物和探针比例,优化退火温度,建立起可以... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分:mtDNA突变标准品的构建及引物探针的优化设计
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第二部分:针对LHON三个突变位点定量检测的TaqMan-MGB探针qPCR方法的建立
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第三部分:三重TaqMan-MGB探针qPCR方法的临床样本验证
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]A Meta-analysis of the association between different genotypes（G11778A, T14484C and G3460A ） of Leber hereditary optic neuropathy and visual prognosis[J]. Dong-Yu Guo,Xia-Wei Wang,Nan Hong,Yang-Shun Gu.  International Journal of Ophthalmology. 2016(10)
[2]线粒体DNA在分子进化研究中的应用[J]. 陈星,沈永义,张亚平.  动物学研究. 2012(06)



本文编号：3724292