《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集》2015年

  本文关键词：宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47对PEDV复制影响，由笔耕文化传播整理发布。

《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集》2015年

猪流行性腹泻病毒CHHeN-ZZ株培养特性研究

李勤楠  周兵强  吴志明  闫若潜  赵雪丽  谢彩华  王淑娟  马震原  曹伟伟  王东方  李宁  

【摘要】：引言 2010年冬季以来,由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)在全国范围内爆发,对哺乳仔猪具有很高的致死率,造成哺乳仔猪腹泻、呕吐、脱水、最后衰竭而死,给养猪业造成了巨大经济损失。本研究通过将河南PEDV流行毒株在Vero细胞上传代培养,成功分离出适应细胞的PEDV CHHeN-ZZ毒株,并对该分离株的培养特性及与不同背景的临床血清的交叉保护性进行研究,为后期开展PEDV变异株与疫苗株之间交叉保护性研究奠定基础。材料与方法将鉴定为PEDV阳性的仔猪肠内容物处理之后,接种于Vero细胞上,在不含血清的病毒维持液中加入终浓度为10μg/mL的胰酶,进行传代培养。对细胞培养物进行RT-PCR、细胞免疫荧光(IFA)鉴定和基因序列测定;对PEDV分离株的细胞培养,增殖规律及稳定传代等培养特性进行研究;采用固定病毒-稀释血清的方法,对不同临床背景血清进行抗体中和试验。结果与讨论结果显示:将病毒接种Vero细胞盲传至第7代,出现细胞病变(CPE),随着代次增加,CPE出现时间变短,呈现规律性变化,RT-PCR鉴定为阳性,IFA检测可见特异性荧光,Sl、M、ORF3基因测序结果为PEDV对应基因片段,确认分离到一株PEDV(CHHeN-ZZ)。通过FQ-PCR,绘制胞内、胞外病毒一步生长曲线,胞内病毒含量0 h~12 h逐步上升,12 h达到峰值,之后逐渐下降,48 h下降幅度突然增大;胞外病毒24 h~72 h出现快速增加,72 h左右达到峰值,之后开始逐步下降。PEDV从第20代到第50代,TCID50稳定在10~(-5.5)~10~(-6.2)/0.1mL之间,现已传至50代,TCID50值为10~(-6.11)/0.1mL;对不同代次分离毒株的M基因和S1基因进行序列分析,第7代与第50代之间的核苷酸同源性分别为99.6%~99.9%、99.8%~99.9%;分离毒株S1基因与CV777疫苗株同属于基因Ⅰ群,利用分离毒株进行抗体中和试验显示:临床上未曾免疫但感染过基因Ⅲ群PEDV的猪场血清中和抗体效价滴度几乎为零,而疫苗免疫猪场血清中和抗体效价在54.1~74.9。本研究成功分离一株PEDV毒株,生长特性良好,能在细胞上稳定传代培养。抗体中和试验证明CV777疫苗株所在基因Ⅰ群毒株与基因Ⅲ群流行毒株之间的免疫交叉性差。本研究为进一步研究PEDV的免疫原性及交叉保护性提供了参考。

【作者单位】：河南科技大学 河南省动物疫病预防控制中心
【分类号】：S852.651
【正文快照】：

猪流行性腹泻病毒CHHeN-ZZ株培养特性研究@李勤楠$河南科技大学!河南洛阳471003 @周兵强$河南科技大学!河南洛阳471003 @吴志明$河南省动物疫病预防控制中心!河南郑州450008 @闫若潜$河南省动物疫病预防控制中心!河南郑州450008 @赵雪丽$河南省动物疫病预防控制中心!

下载全文更多同类文献

PDF全文下载

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 古洪浪;邓胜朝;崔进;刘晓露;刘超;袁航;马岚;张桂红;;猪流行性腹泻病毒PEDV-GD12株的分离与鉴定[J];中国兽医杂志;2013年11期

2 杜晓莉;王一成;吴润;徐丽华;袁秀芳;李军星;周晓丽;;2010—2013年浙江省猪流行性腹泻病毒临床检测及PEDV-S基因型分析[J];浙江农业学报;2014年03期

3 邓祖丽颖;陈陆;;猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用[J];中国畜牧兽医;2014年01期

4 李宝贤;马广鹏;葛俊伟;李一经;;猪流行性腹泻病毒功能性受体的鉴定[J];病毒学报;2009年03期

5 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

6 乔宪凤,熊忠良,华文君,郑新民;PEDV膜蛋白基因RT-PCR最适反应条件的确立[J];湖北畜牧兽医;2001年01期

7 高慎阳;王珅;周铁忠;李一经;;PEDV M蛋白N端的1～20aa的序列结构与功能分析[J];黑龙江畜牧兽医;2010年15期

8 ;猪的运输过程是猪流行性腹泻病毒传播源头之一[J];养殖与饲料;2014年04期

9 郑逢梅;赵军;霍金耀;李欢;杨霞;陈陆;常洪涛;王新卫;刘红英;杜季梅;姚慧霞;王川庆;;PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立[J];中国兽医学报;2014年03期

10 孙东波;朗洪武;时洪艳;陈建飞;崔晓辰;王承宝;佟有恩;冯力;;PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定[J];生物化学与生物物理进展;2007年09期

中国重要会议论文全文数据库 前6条

1 余丽芸;侯喜林;;Development and Evalutaion of Enzyme-Linked mmunosorbent Assay Based on Recombinant Nucleocapsid Protein for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea (PEDV) Antibodies[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

2 孙东波;冯力;时洪艳;陈建飞;;猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

3 孙东波;朗洪武;时洪艳;陈建飞;崔晓辰;王承宝;佟有恩;冯力;;PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

4 郑逢梅;赵军;霍金耀;李欢;杨霞;常洪涛;杜季梅;王晓梦;王川庆;;PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年

5 ;Identification of two novel B cell epitopes on porcine epidemic diarrhea virus spike protein[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

6 ;Spike protein region (aa 636～789) of porcine epidemic diarrhea virus is essentIal for induction of neutralizing antibodies[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 石达;宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47对PEDV复制影响[D];中国农业科学院;2015年

2 毕静;猪流行性腹泻病毒AJ1102株的分离、鉴定及其分子进化特征[D];华中农业大学;2013年

3 葛俊伟;猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白不同抗原片段在重组干酪乳杆菌中的表达及其免疫学评价[D];东北农业大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张百灵;猪流行性腹泻病毒（PEDV）木瓜样蛋白酶功能研究[D];扬州大学;2011年

2 石明明;猪流行性腹泻病毒（PEDV）及其抗体检测方法的研究与应用[D];南京农业大学;2012年

3 徐天;猪IEC酵母cDNA文库的构建及与PEDV结构蛋白互作蛋白的筛选[D];中国农业科学院;2015年

4 潘溪;猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及ELISA检测方法的初步建立[D];中国农业科学院;2015年

5 蔡青秀;猪流行性腹泻病毒主要结构基因遗传变异分析及ELISA检测方法的建立[D];中国兽医药品监察所;2015年

6 刘连增;猪流行性腹泻病毒全长cDNA克隆及复制子的构建[D];华中农业大学;2015年

7 高杏丹;PEDV福建野毒株主要功能基因的分子遗传学特征比较[D];福建师范大学;2013年

8 杜季梅;仔猪病毒性腹泻流行病学调查及卵黄抗体在PEDV防治中的应用[D];河南农业大学;2013年

9 孙振;猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR方法和间接ELISA方法的建立与初步应用[D];山东农业大学;2014年

10 唐莹;减毒沙门氏菌递呈PEDV S/M双基因核酸疫苗研究[D];四川农业大学;2012年

  本文关键词：宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47对PEDV复制影响，，由笔耕文化传播整理发布。