利用猪单个胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位点检测方法

发布时间：2025-04-26 21:02

　　 基因工程猪可作为动物模型研究人类疾病,也是异种器官移植最合适的供体.CRISPR/Cas9系统是高效特异的基因编辑工具.因此本文通过显微注射的方式将sg RNA和Cas9 m RNA注射入单细胞期的孤雌胚胎中,待其发育为囊胚后检测打靶效率.T7EN1酶切和TA克隆测序结果表明,本研究可以在猪的孤雌胚胎中同时实现3个基因(B2M,CIITA,GGTA1或者LDLR,LEP,LEPR)的高效敲除(敲除率分别为62.5%和50%),为使用CRISPR/Cas9系统高效、快速和经济地建立多基因修饰的猪模型提供了基础.

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【部分图文】：

图1靶位点分布以及pUC57-sgRNA表达载体示意图

中国科学:生命科学2016年第46卷第3期309图1靶位点分布以及pUC57-sgRNA表达载体示意图A:B2M,CIITA,GGTA1和LDLR,LEP,LEPR的部分蛋白编码区与Cas9/sgRNAs的靶位点区域示意图.灰条框表示外显子,黑色粗线表示内含子;PAM（proto....

图2CRISPR/Cas9介导的单个囊胚多基因修饰情况

康难难等:利用猪单个胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位点检测方法310图2CRISPR/Cas9介导的单个囊胚多基因修饰情况A:验证sgRNA-Cas9介导的多基因修饰的效率.左图为PCR扩增免疫排斥相关基因(B2M,CIITA和GGTA1)与脂代谢相关基因(LDLR....

图1靶位点分布以及pUC57-sgRNA表达载体示意图

中国科学:生命科学2016年第46卷第3期309图1靶位点分布以及pUC57-sgRNA表达载体示意图A:B2M,CIITA,GGTA1和LDLR,LEP,LEPR的部分蛋白编码区与Cas9/sgRNAs的靶位点区域示意图.灰条框表示外显子,黑色粗线表示内含子;PAM（proto....

图2CRISPR/Cas9介导的单个囊胚多基因修饰情况

康难难等:利用猪单个胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位点检测方法310图2CRISPR/Cas9介导的单个囊胚多基因修饰情况A:验证sgRNA-Cas9介导的多基因修饰的效率.左图为PCR扩增免疫排斥相关基因(B2M,CIITA和GGTA1)与脂代谢相关基因(LDLR....

本文编号：4041356