骨髓间充质干细胞体外扩增及其与神经类细胞共培养的研究

发布时间：2025-05-11 07:13

　　中枢神经系统(central nervous system, CNS)疾病与损伤,如帕金森病(Parkinson's disease, PD)、脊髓损伤等比较难以自我修复,神经干细胞(neural stem cells, NSCs)移植被认为是具有潜在应用价值的治疗手段,但NSCs来源困难。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)以其多分化潜能、可源于自体、免疫源性低、易扩增、能分泌多种细胞因子并参与细胞微环境的构建等优势,为CNS疾病与损伤的治疗提供了一个新的思路。本文旨在研究BMSCs扩增后通过与NSCs之间的相互作用促进PD体外实验细胞模型的修复,进一步为BMSCs移植治疗与修复CNS疾病与损伤提供相应的实验依据。 本文首先采用胶原凝胶、中空纤维膜(hollow fiber membranes, HFMs)和自行研发设计的气升式环流生物反应器(air-lift loop bioreactor, ALB),建立一种可使细胞免受剪切力损伤的三维动态扩增体系,将BMSCs在体外先行扩增。在扩增的过程中,通过取样检测吸光度...

【文章页数】：137 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 骨髓间充质干细胞培养及其促进神经修复的研究简介
    1.1 概述
    1.2 BMSCs生物学性能简介
        1.2.1 BMSCs的发现、定义
        1.2.2 BMSCs的生物学特性
        1.2.3 BMSCs的主要表面标志
        1.2.4 BMSCs的多向分化潜能
        1.2.5 BMSCs的旁分泌功能
        1.2.6 BMSCs体外扩增研究进展
    1.3 BMSCs促进神经修复的相关研究
        1.3.1 BMSCs移植治疗CNS疾病及存在的问题
        1.3.2 BMSCs促进神经修复的作用机理
        1.3.3 BMSCs与NSCs相互作用的研究
    1.4 帕金森病细胞模型
        1.4.1 细胞凋亡与帕金森病
        1.4.2 细胞凋亡模型建立方法
    1.5 本文的选题依据和研究内容
2 骨髓间充质干细胞的获取及体外三维动态培养与扩增
    2.1 引言
    2.2 实验仪器与材料
        2.2.1 实验仪器与设备
        2.2.2 药品与试剂
        2.2.3 溶液与试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 BMSCs的分离与培养
        2.3.2 细胞形态学观察
        2.3.3 胶原凝胶的微观结构
        2.3.4 BMSCs的准备
        2.3.5 BMSCs在ALHFMB内三维动态扩增
        2.3.6 细胞增殖
        2.3.7 代谢分析
        2.3.8 ALHFMB内氧、二氧化碳分压及pH值测定
        2.3.9 支架内细胞活性检测
        2.3.10 支架内细胞形态观察
        2.3.11 干细胞表面特异性标记检测
        2.3.12 多向分化潜能的检测
        2.3.13 统计学分析
    2.4 结果
        2.4.1 原代及传代培养的BMSCs生长形态
        2.4.2 胶原凝胶的微观结构
        2.4.3 细胞增殖
        2.4.4 支架内细胞的代谢
        2.4.5 ALHFMB内氧、二氧化碳分压及pH值
        2.4.6 支架内细胞活性
        2.4.7 支架内细胞的形态
        2.4.8 细胞表面特异性蛋白的表达
        2.4.9 扩增细胞的多向分化潜能
    2.5 讨论
    2.6 小结
3 BMSCs与三维条件下NSCs相互作用的研究
    3.1 引言
    3.2 实验仪器与材料
        3.2.1 实验仪器与设备
        3.2.2 药品与试剂
        3.2.3 溶液与试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 BMSCs的分离、培养、扩增及鉴定
        3.3.2 NSCs的分离与培养
        3.3.3 NSCs诱导分化及免疫组织化学鉴定
        3.3.4 海藻酸钙胶珠的制备
        3.3.5 NSCs微囊化培养
        3.3.6 BMSCs与NSCs共培养
        3.3.7 增殖共培养后BMSCs对NSCs的影响
        3.3.8 分化共培养后NSCs的流式细胞仪检测
        3.3.9 增殖共培养后NSCs对BMSCs的影响
        3.3.10 分化共培养后NSCs对BMSCs的影响
        3.3.11 统计学分析
    3.4 结果
        3.4.1 NSCs的原代及传代培养
        3.4.2 NSCs免疫组织化学及诱导分化鉴定
        3.4.3 适宜NSCs生长的海藻酸钙胶珠
        3.4.4 NSCs微囊化培养
        3.4.5 增殖共培养后BMSCs对NSCs的影响
        3.4.6 分化共培养后BMSCs对NSCs的影响
        3.4.7 增殖共培养后NSCs对BMSCs的影响
        3.4.8 分化共培养后NSCs对BMSCs的影响
    3.5 讨论
    3.6 小结
4 BMSCs在NSCs保护去血清诱导PC12细胞凋亡中的作用
    4.1 引言
    4.2 实验仪器与材料
        4.2.1 实验仪器与设备
        4.2.2 药品与试剂
        4.2.3 药品与试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 BMSCs的分离、培养、扩增及鉴定
        4.3.2 NSCs的分离、培养与鉴定
        4.3.3 PC12细胞的培养及去血清诱导凋亡模型的建立
        4.3.4 海藻酸钙胶珠与PC12细胞的生物相容性
        4.3.5 NSCs对去血清诱导PC12细胞凋亡的保护作用
        4.3.6 BMSCs在NSCs保护去血清诱导PC 12细胞凋亡中的作用
        4.3.7 Hoechst 33342染色分析
        4.3.8 流式细胞仪分析PC12细胞凋亡率
        4.3.9 流式细胞仪分析PC12细胞周期
        4.3.10 培养基中GDNF浓度的测定
        4.3.11 统计学分析
    4.4 结果
        4.4.1 PC12细胞的培养及去血清诱导凋亡模型
        4.4.2 海藻酸钙胶珠与PC12细胞的生物相容性
        4.4.3 单独NSCs对去血清诱导凋亡的PC12细胞存活率的作用
        4.4.4 BMSCs与NSCs对诱导凋亡的PC12细胞存活率的共同作用
        4.4.5 Hoechst 33342染色分析
        4.4.6 流式细胞仪分析PC12细胞凋亡率
        4.4.7 流式细胞仪分析PC12细胞周期
        4.4.8 不同培养条件下培养基中GDNF浓度的比较
    4.5 讨论
    4.6 小结
结论
工作展望
创新点摘要
参考文献
附录A 英文缩略词
作者简介
致谢



本文编号：4045044