轴突导向因子3A体外通过神经细胞作用促进成骨的研究

发布时间：2025-07-06 23:32

　　实验目的:骨组织受到包括神经系统在内的诸多因素影响与调节。近来研究证实,轴突导向因子3A(Semaphorin3A)是一种具有调节骨量功能的化学趋化因子。但其调节骨组织的机制尚不清晰。施旺细胞作为参与神经损伤后修复的重要成员,在许多生理病理条件下与轴突导向蛋白相互作用。本实验的目的是初步探究神经细胞在轴突导向因子3A促进成骨分化的过程中的作用与机制,从而进一步了解神经组织在骨组织动态变化中的具体作用与其影响因素,为骨相关性疾病的治疗与预防提供理论基础。实验方法:1.构建人成骨样细胞MG63与人施旺细胞共培养体系,测定共培养后第1天,3天,5天的细胞增殖情况,筛选出最佳的细胞共培养比例。2.确定最佳共培养比例后,将轴突导向因子3A分别加入至MG63,施旺细胞以及最佳比例共培养体系中,构建梯度浓度(0,25,50,100 ng/m L)的细胞培养环境,培养1天,3天,5天后,观察细胞活力并检测细胞凋亡,以鉴定设定浓度下的轴突导向因子3A是否会对实验细胞产生促进/抑制细胞增殖或细胞凋亡的作用。3.将轴突导向因子3A分别加入至MG63,施旺细胞以及最佳比例共培养体系中,构建梯度浓度(0,25,5...

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【学位级别】：硕士

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引言
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 研究背景与现状
    1.1 骨重塑与骨系细胞
        1.1.1 骨基本多细胞单元
        1.1.2 成骨细胞与骨重塑
        1.1.3 破骨细胞与骨重塑
        1.1.4 成骨细胞与破骨细胞的相互调控与骨重塑
    1.2 神经系统与骨重塑
        1.2.1 中枢神经系统与骨重塑
        1.2.2 周围神经系统与骨重塑
    1.3 轴突导向因子与骨重塑
        1.3.1 轴突导向因子家族
        1.3.2 轴突导向因子与骨
        1.3.3 轴突导向因子 3A与骨重塑
    1.4 施旺细胞及神经损伤修复
第二章 材料与方法
    2.1 实验设备与材料
        2.1.1 主要实验设备
        2.1.2 主要实验试剂及材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养及共培养体系的建立
            2.2.1.1 细胞培养条件
            2.2.1.2 共培养体系的建立
        2.2.2 Sema3A对细胞增殖、凋亡的影响与细胞毒性
            2.2.2.1 细胞增殖检测
            2.2.2.2 细胞凋亡检测
            2.2.2.3 细胞毒性测定
        2.2.3 Sema3A受体表达检测
            2.2.3.1 总RNA的提取及逆转录
            2.2.3.2 实时聚合酶链式反应
            2.2.3.3 DNA凝胶电泳
        2.2.4 成骨基因表达检测
        2.2.5 碱性磷酸酶检测
        2.2.6 细胞外基质矿化染色
        2.2.7 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 共培养体系的建立
    3.2 Sema3A对细胞增殖、细胞凋亡的影响及其细胞毒性
    3.3 Sema3A受体表达
    3.4 成骨相关基因表达
    3.5 碱性磷酸酶检测及细胞外基质矿化染色
第四章 讨论
    4.1 共培养体系建立及Sema3A对细胞增殖代谢的影响
    4.2 Sema3A受体表达
    4.3 Sema3A抑制MG63成骨分化
    4.4 Sema3A促进 1：1 共培养成骨分化
    4.5 Sema3A在口腔治疗的潜力
第五章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：4056139