缝隙连接蛋白43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的调节作用

发布时间：2025-05-07 02:54

　　 目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的调控作用。方法利用Cx43-siRNA及其相关miRNA的抑制剂下调或上调人皮肤成纤维细胞(hDFBs)中Cx43的水平,利用Western印迹法和免疫荧光染色法检测细胞内COL-Ⅰ的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法评估Cx43水平下降后COL-Ⅰ、基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;用免疫共沉淀(Co-IP)法检测Cx43分别与MMP-1、MMP-9或蛋白激酶(PK)D1的结合情况。结果 COL-Ⅰ表达水平与Cx43水平呈负相关(P<0.001);Cx43水平降低导致MMP-1、MMP-9在mRNA及蛋白水平均显著增加(P<0.001,P<0.01,P<0.05);且PKD1表达也明显降低。结论 Cx43参与hDFBs中COL-Ⅰ的调控并发挥重要作用,其机制很可能与PKD1密切相关。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 hDFBs的培养
    1.3 瞬时转染siRNA或miRNA抑制剂
    1.4 免疫荧光染色法
    1.5 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)
    1.6 Western印迹法
    1.7 免疫共沉淀(Co-IP)法
    1.8 统计学分析
2 结 果
    2.1 Cx43 siRNA对hDFBs中Cx43表达的沉默效果
    2.2 COL-Ⅰ的表达与Cx43的相关性
    2.3 Cx43对COL-Ⅰ及其相关酶MMP-1、MMP-9的影响
    2.4 Cx43参与调解COL-Ⅰ的可能机制
3 讨 论



本文编号：4043493