eIF-5A基因钓

发布时间：2025-05-29 06:03

　　真核起始因子5A(eIF-5A)普遍存在于所有真核细胞内，是目前发现唯一一个含有hypusine残基的蛋白质。本工作首先从Mo7e细胞中提取RNA，通过RT-PCR方法钓取eIF-5A，在确认序列正确的基础上，构建eIF-5A的原核表达载体。诱导表达后，通过钴离子柱进行亲和纯化，然后通过免疫印记和肽质量指纹谱方法对重组蛋白进行鉴定，并用原子力显微镜对其结构进行了初步分析。用得到的重组蛋白分别免疫家兔和小鼠，获得兔的抗血清和三株持续分泌单抗的杂交瘤细胞株，为进一步分析eIF-5A的功能提供了检测手段。eIF-5A的hypusine修饰是其活性和功能发挥所必需的，我们通过PCR方法实现了hypusine位点的定点突变，并进一步构建了含GFP标签的eIF-5A及其hypusine位点突变的真核表达载体。瞬时转染细胞，eIF-5A表达初期为全细胞分布，而后逐渐转移至细胞质，表明其具有核质穿梭功能。然后利用氨基酸突变、添加阻断剂等方法，抑制eIF-5A的hypusine修饰，观察到eIF-5A始终为全细胞分布，提示抑制hypusine的形成可影响eIF-5A的亚细胞定位，进而影响其功能的发挥。进一...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 eIF-5A蛋白质表达载体的构建与鉴定
    材料与方法
    结果与讨论
    小结
第二部分 重组eIF-5A蛋白质的原核表达和抗体制备
    材料与方法
    结果与讨论
    小结
第三部分 eIF-5A的亚细胞定位及功能的初步研究
    材料与方法
    结果
    讨论
    小结
总结
参考文献
致谢
附录
    英文缩略词
文章发表与交流



本文编号：4048842