结核分支杆菌TB32Ag、MPT64Ag的基因克隆及初步表达

发布时间：2025-06-18 22:50

　　结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是结核病的主要致病菌。找到结核分支杆菌的特异性抗原对于发展准确有效的诊断方法具有重要作用。结核分支杆菌TB4抗原是特指分子量集中于32KD⁴0KD、及28KD、23KD²5KD的多肽抗原组。它是与结核病特异性诊断相关的成份，对结核病诊断的敏感性为0.9012，特异性为0.9639。可见，这一成份在结核病诊断中具有一定的应用价值。按照传统的方法，TB4抗原的制备，要从结核分支杆菌H37Rv菌株中提取，既费时又费事，对人体造成致病威胁。而采用基因工程技术制备TB4抗原则克服了上述困难。 本研究从灭活的人型结核分支杆菌H37Rv菌株中提取细菌总DNA，根据TB4两种抗原成份：TB32Ag和MPT64Ag的基因合成引物（P1，P2），以总DNA为模板，用特异性引物（P1，P2）进行聚合酶链式反应（PCR），扩增出TB32Ag，MPT64Ag基因， 并进行核苷酸序列分析。结果表明：所克隆的TB32Ag由568 bp组成，编码189个氨基酸； MPT64Ag由644 bp...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
一、 摘要
    Abstract
二、 绪论
    2.1 抗原成份研究进展
    2.2 结核分支杆菌TB4抗原
    2.3 TB32Ag与MPT64Ag抗原成份
    2.4 基因工程技术与结核抗原成份研究
    2.5 结核病的诊断现状
三、 实验材料
    3.1 菌种与质粒
    3.2 各种培养基
    3.3 主要生化试剂
    3.4 基因工程酶类
    3.5 标准分子量Marker
    3.6 各种主要缓冲液
    3.7 主要仪器
四、 实验方法
    4.1 结核分支杆菌H37Rv菌株DNA的制备与纯化
    4.2 质粒DNA的制备
    4.3 PCR扩增制备目的基因
    4.4 PCR产物的克隆
    4.5 目的基因的初步表达
    4.6 目的基因表达产物的免疫学鉴定
五、 结果
    5.1 质粒DNA图谱
    5.2 TB32AgMPT64Ag基因的克隆与筛选
    5.3 重组质粒的诱导表达及其表达产物的SDS-PAGE鉴定
    5. 4 重组表达产物的免疫学鉴定
    5.5 低分子量蛋白质标准曲线
六、 讨论
    6.1 结核分支杆菌DNA提取方法探讨
    6.2 各种Tag聚合酶性能探讨
    6.3 原核系统表达探讨
    6.4 重组菌蛋白表达的免疫学鉴定
    6.5 理论与实际意义
七、 全文小结
八、 参考文献
九、 致谢



本文编号：4050455