抗禽H9N2流感病毒树突状细胞靶向重组乳酸菌的构建及其免疫效果评价

发布时间：2017-04-12 18:02

  本文关键词：抗禽H9N2流感病毒树突状细胞靶向重组乳酸菌的构建及其免疫效果评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究利用乳酸菌作为黏膜疫苗递呈载体的诸多优势,构建了特异性靶向树突状细胞的抗H9N2禽流感病毒的重组乳酸菌,并研究了该重组乳酸菌对小肠上皮细胞的黏附能力以及评价了其对小鼠的免疫效果。本研究首先对HA-GCN4-DCpep基因序列进行密码子优化,之后将其连接到穿梭表达载体p SSIP409上,构建重组表达载体p SSIP409-HA-GCN4-DCpep。该重组载体随后经过电转化途径导入乳酸菌NC8内,构建出L.p-HA-GCN4-DCpep重组乳酸菌。通过质粒双酶切和western blot实验证实,该重组乳酸菌构建正确并且能够正确表达出具有反应原性的H9N2禽流感病毒的HA蛋白。L.p-HA-GCN4-DCpep重组乳酸菌按照免疫程序免疫BALB/c小鼠,研究其对肠上皮细胞的黏附能力。本实验分别在免疫的不同时间点,收集小鼠肠段匀浆液,10倍倍比稀释后进行涂板计数。结果显示,重组乳酸菌能够在小鼠空肠、回肠、盲肠、结肠内黏附并定植。免疫攻毒实验结果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重组乳酸菌免疫小鼠后能够诱导较好的黏膜免疫应答,诱导脾、PP结、肠系膜淋巴结中CD3+CD4+和CD3+CD8+T增殖,引起肠道和肺泡内特异性s Ig A的分泌以及血清中特异性Ig G和多种细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-6、IL-10)的表达。与L.p对照组相比,L.p-HA-GCN4-DCpep组小鼠攻毒后的体重下降程度最轻,而且s Ig A和Ig G抗体水平明显高于对照组。上述研究结果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重组乳酸菌具有良好的免疫原性,可以抵抗H9N2禽流感病毒的感染,其中HA的修饰标签—树突状细胞靶向肽(DCpep)在乳酸菌诱导黏膜免疫应答中发挥了重要作用。本研究为进一步探讨重组乳酸菌在激发黏膜免疫反应过程中,树突状细胞调控黏膜免疫应答的机制及研制抗禽流感口服疫苗奠定基础。
【关键词】：H9N2禽流感病毒 重组乳酸菌 DCpep 黏附 黏膜免疫
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 内容提要4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 引言11-12
• 第一篇 文献综述 乳酸菌在黏膜免疫递呈系统中的研究进展12-19
• 一、LAB疫苗的研究及应用13-16
• 二、影响LAB疫苗免疫原性的因素16-17
• 三、增强LAB疫苗黏膜免疫应答的策略17-18
• 四、结语18-19
• 第二篇 研究内容19-45
• 第一章 抗H9N2禽流感病毒DC靶向重组乳酸菌的构建19-29
• 1.1 材料19-21
• 1.2 方法21-25
• 1.3 结果25-28
• 1.4 讨论28
• 1.5 小结28-29
• 第二章 重组乳酸菌对肠上皮细胞的黏附能力研究29-33
• 2.1 材料29
• 2.2 方法29-31
• 2.3 结果31-32
• 2.4 讨论32
• 2.5 小结32-33
• 第三章 重组乳酸菌的黏膜免疫效果评价33-45
• 3.1 材料33-34
• 3.2 方法34-37
• 3.3 结果37-42
• 3.4 讨论42-44
• 3.5 小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-59
• 导师简介59-60
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果60-61
• 致谢61

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