脂多糖刺激对奶牛输卵管上皮细胞PGE 2 和PGF 2α 合成分泌的影响研究

发布时间：2025-05-01 11:43

　　前列腺素E2是一种重要的炎性介质,是由环氧合酶催化花生四烯酸代谢产生的一种二十碳不饱和脂肪酸,当机体组织器官受到细菌毒素侵害后,细胞产生包括前列腺素E2在内的大量的炎症介质。本实验通过利用细菌脂多糖刺激奶牛输卵管上皮细胞,检测与前列腺素E2和F2α有关的合成酶的表达状况,以及脂多糖对前列腺素E2和F2a合成分泌的影响。旨在阐明感染G-致病菌时,奶牛输卵管过量分泌前列腺素E2和F2α的病理学机制,为治疗由炎症引起的输卵管分泌失调病症搜集基础实验数据。 方法：1)建立奶牛输卵管上皮细胞体外培养技术。2)不同浓度1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL的LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞培养24h,采用实时荧光定量PCR技术检测COX-1、COX-2mRNA表达量,以确定LPS的最佳作用浓度。3)采用实时荧光定量PCR技术检测LPS不同作用时间(2h、4h、8h、16h、24h、48h、72h)对奶牛输卵管上皮细胞COX-1、COX-2、mPGES-1、 mPGES-2、cPGES和PGFS mRNA表达的影响。4)采用实时荧光定量PCR技术检测COX抑制...

【文章页数】：58 页

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摘要
Abstract
目录
插图和附表清单
縮略语表
1 前言
    1.1 前列腺素类化合物
        1.1.1 前列腺素类化合物的生殖生理作用
        1.1.2 前列腺素类化合物的生殖病理作用
    1.2 前列腺素类化合物对输卵管的调节功能
        1.2.1 输卵管组织形态结构
        1.2.2 输卵管功能及前列腺素类化合物的作用
    1.3 输卵管炎症
    1.4 细菌毒素脂多糖
    1.5 NF-κ B信号转导途径
    1.6 研究目的与意义
2 实验部分
    2.1 试验材料
        2.1.1 奶牛输卵管
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 试验仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 奶牛输卵管上皮细胞原代培养
        2.2.2 奶牛输卵管上皮细胞传代培养
        2.2.3 MTT法检测LPS对奶牛输卵管上皮细胞存活率检测
        2.2.4 确定LPS刺激奶牛输卵管上皮细胞的药物作用浓度试验
        2.2.5 检测PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表达量的影响
        2.2.6 有关抑制剂对奶牛输卵管上皮细胞COXs及PGs mRNA表达量的影响
        2.2.7 总RNA的提取
        2.2.8 cDNA的制备及Real Time PCR的准备
        2.2.9 奶牛输卵管上皮细胞PGE₂、PGF_2α含量的测定
    2.3 数据处理分析
3 实验结果部分
    3.1 细胞形态学观察
    3.2 MTT检测细胞存活率结果
    3.3 线性分析及特异性检测
        3.3.1 扩增效率曲线分析
        3.3.2 扩增及溶解曲线分析
    3.4 LPS刺激奶牛输卵管上皮细胞作用浓度的确定试验
    3.5 LPS刺激对PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表达的时间-效应关系
        3.5.1 LPS对奶牛输卵管上皮细胞COX-1、COX-2 mRNA表达的时间效应关系
        3.5.2 LPS对奶牛输卵管上皮细胞mPGES-1、mPGES-2、cPGES、PGFS mRNA表达的时间-效应关系
    3.6 有关抑制剂类药物对LPS诱导奶牛输卵管上皮细胞PGs合成酶表达量的影响
    3.7 奶牛输卵管上皮细胞PGE₂、PGF_2α含量的测定
        3.7.1 蛋白浓度标准曲线及PGE₂、PGF_2αELISA标准曲线
        3.7.2 LPS刺激奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影响
        3.7.3 相关抑制剂对LPS所致奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影响
4 讨论
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：4042222