鸭ChREBP基因表达载体构建及其对原代肝细胞和PC3细胞脂质性状的影响

发布时间：2025-06-20 23:13

　　 【目的】探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据。【方法】采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培养基进行培养。利用RT-PCR扩增鸭ChREBP基因编码区(CDS)序列,构建携带His标签的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His,通过脂质体法分别转染鸭胚原代肝细胞和人前列腺癌细胞(PC3);采用His标签检测试剂盒检测ChREBP基因的表达量,以脂质指标测定试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鸭胚原代肝细胞和PC3细胞中ChREBP基因表达与脂质指标含量的相关性。【结果】以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞均能发出绿色荧光,表明携带His标签的ChREBP基因能在鸭原代肝细胞和PC3细胞中表达。ChREBP基因表达量与鸭原代肝细胞和PC3细胞中的TG、TC和HDL含量均呈极显著正相关(P<0.01,下同),与...

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【部分图文】：

图1 鸭原代肝细胞初分离效果检测

以EcoRI和KpnI双酶切pEGFP-N3载体和重组质粒pUCm-T-ChREBP，纯化回收携带黏性末端的目的片段，T4连接酶作用构建真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His，经双酶切鉴定、菌液PCR扩增及测序验证，结果（图4）表明已成功构建获得真核表达载体pE....

图2 鸭原代肝细胞培养贴壁情况（×200)

图1鸭原代肝细胞初分离效果检测图3PC3细胞培养贴壁情况（×200)

图3 PC3细胞培养贴壁情况（×200)

图2鸭原代肝细胞培养贴壁情况（×200)图4真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His的双酶切鉴定（左）及菌液PCR扩增（右）电泳结果

图4 真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His的双酶切鉴定（左）及菌液PCR扩增（右）电泳结果

图3PC3细胞培养贴壁情况（×200)2.4真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞的效果

本文编号：4051540