布鲁氏菌Omp10-Omp28-L7/L12融合蛋白在乳酸乳球菌中的表达及其免疫效果初步研究

发布时间：2025-07-01 22:03

　　布鲁氏菌病(Brucellosis)是由胞内寄生菌布氏杆菌属侵入机体引起的一种人和动物都能感染的细菌性传染病,简称布病。世界上大部分地区都有布鲁氏菌病的发生,成为严重威胁人类健康和经济发展的问题。近年来,布鲁氏菌病的流行越来越严重,我国也不例外,进行布鲁氏菌病的防控显得尤为重要,免疫接种是预防布鲁氏菌病的一个重要手段,目前常用的疫苗主要是布鲁氏菌弱毒活疫苗,这些疫苗虽具有良好的保护能力,但其也存在不足之处,如具有一定毒性、易感染人,而且干扰血清学检测,导致无法区分自然感染动物与免疫动物等,因此,研究一种更好的布病新型疫苗越来越重要。乳酸乳球菌表达系统是一种安全、高效的表达系统,经常应用于亚单位疫苗的制作,本研究将布鲁氏菌Omp10、Omp28、L7/L12三个优势抗原基因串联后导入乳酸乳球菌表达系统中,构建能够表达布鲁氏菌融合蛋白Omp10-Omp28-L7/L12的乳酸乳球菌免疫制剂。乳酸乳球菌是自然界中常见的益生菌种,是公认的安全级微生物,且乳酸乳球菌可以长时间定植在肠道,刺激机体黏膜免疫反应从而引起全身免疫反应。因此本试验选用乳酸乳球菌表达系统,首先利用PCR技术扩增公司合成的Om...

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图2电转化后结果

图2电转化后结果Fig.2TheresultofelectroporationL7/L12融合基因重组乳酸乳球菌表达载体取阳性菌落并提取质粒，对重组表达质粒异性条带大小约为2109bp，与预期大小一鉴定结果正确（图4），公司测序结果也

图3重组质粒PCR鉴定

鉴定结果正确（图4），公司测序结果也与参考序列相符，说明菌构建成功。序列正确的重组质粒命名为pNZ8148-8-L7/L12，对应的重组乳酸菌命名为pNZ8148-8-L7/L12/NZ9000。

图4重组表达质粒pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12双酶切鉴定

48-Omp10-Omp28-L7/L12双酶切鉴定图.M:DNAmarker.1:酶combinantplasmidpNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12byNcoIarker.1:Pre-cleavageplasmid..2:Plasmid....

图.M:DNAmarker.1:酶切前质粒.2:酶切后质粒Fig.4DigestionofrecombinantplasmidpNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12byNcoIandXbaI.M:DNAmarker.1:Pre-cleavageplasmid..2:Plasmidafterenzymaticdigestion

融合蛋白在乳酸乳球菌中的表达及其免疫效果初步研究24图4重组表达质粒pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12双酶切鉴定图.M:DNAmarker.1:酶切前质粒.2:酶切后质粒Fig.4Digestionofrecombinantplasmidp....

本文编号：4054757