孕期缺氧对胎鼠及子代神经系统Wnt/β-catenin信号通路甲基化重编程的影响

发布时间：2025-06-27 03:05

　　目的:研究孕期缺氧对子代神经系统Wnt信号通路的影响。方法:孕鼠随机分为正常组和缺氧组,每组各13只。缺氧组从孕第4天开始给予10.5%O2,正常组给予21%O2,在孕21天时,一部分孕鼠麻醉后取出胎鼠,立即称重,接着取出胎鼠脑组织前部(含海马组织),液氮浇灌后立即放入-80℃冰箱中保存。另外一部分孕鼠自然分娩,子代一个月后进行分笼,待6周时进行水迷宫实验,检测两组大鼠的学习记忆能力,然后取出海马组织。采用蛋白印迹方法和q-PCR方法分别检测胎鼠脑组织和6周子代海马组织中相关蛋白及基因的表达。采用甲基化测序检测胎鼠脑组织和6周子代海马组织中甲基化水平的变化。此外,经5-aza处理PC12细胞后,检测PC12细胞相关基因的表达情况。结果:孕期缺氧组胎鼠脑重和体重均下降,而脑重/体重的比值上升;缺氧组Wnt3a,Wnt7a,Wnt7b,Fzd4,β-catenin,Hif1a和Fosl1表达上调,Lrp6的表达无统计学差异。在Sfrps中,仅有Sfrp4的表达下调,且甲基化测序提示Sfrp4甲基化水平在缺氧组明显升高。在调节基因组甲基化水平的基因中,Dnmt1和Dnmt3b的表达上调。使用5...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
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引言
    参考文献
第一部分 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂
    1.3 主要仪器
    1.4 常用缓冲液
    1.5 Real-time PCR引物
    1.6 方法
        1.6.1 实验动物
        1.6.2 胎鼠体重及脑重的测量
        1.6.3 水迷宫实验
        1.6.4 胎鼠前脑组织、6周子代海马组织及PC12细胞Wnt亚型、Fzd4、Lrp5/6、β-catenin、Sfrps、Dnmts及Fosl1的mRNA表达水平等的检测
        1.6.5 胎鼠前脑组织、6周子代海马组织及PC12细胞中Hif1a、β-catenin及Active-β-catenin等蛋白表达水平的检测
        1.6.6 甲基化测序检测胎鼠前脑组织及6周子代海马组织中Sfrp4启动子区域的甲基化水平
    1.7 统计分析
第二部分 实验结果
    2.1 孕期缺氧对胎鼠脑重、体重及脑重/体重比值的影响
    2.2 孕期缺氧导致胎鼠血氧水平及血氧饱和度下降
    2.3 孕期缺氧导致胎鼠脑组织中Hif1a和Wnt/β-catenin信号通路的上调
    2.4 孕期缺氧导致胎鼠脑组织中Sfrp4甲基化水平升高及表达下调
    2.5 孕期缺氧抑制6周子代海马组织Wnt/β-catenin信号通路的激活
    2.6 孕期缺氧导致6周子代海马空间学习与记忆的下降
    2.7 经5-aza-2'-deoxycytidine处理的PC12细胞其Sfrp4表达上调及活化的β-catenin蛋白水平下调
    2.8 Dnmts,Sfrp4和Wnt/β-catenin信号通路从胎鼠期到6周子代的表观遗传修饰重编程
第三部分 讨论
结论
参考文献
综述 Sfrps及表观修饰与相关疾病的研究进展
    参考文献
英文缩略词表
攻读硕士研究生期间发表论文及参与的研究项目
致谢



本文编号：4053706