β1诱导人肺成纤维细胞活化的影响及分子机制研究

发布时间：2016-11-24 06:43

  本文关键词：外源性硫化氢对TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞转化的影响及其可能机制，由笔耕文化传播整理发布。

《暨南大学》 2015年

泛素—蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化的影响及分子机制研究

曹述任  

【摘要】：研究背景肺纤维化是已知或未知病因的具有相似病理过程的一组弥漫性肺疾病的共同病理改变。其病理特征主要表现为肺间质/肺泡炎性细胞的浸润,成纤维细胞的过度增殖、活化,细胞外基质成分的大量合成、沉积等而致使正常肺组织的结构改变及功能丧失。大量研究已表明,转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)在这一病理过程中发挥着关键性的作用。TGF-β1通过细胞内信号转导通路发挥作用,而Smad是其目的基因转录的主要信号转导蛋白。这一信号转导通路受到严格而精确的调控,从而保证在正常的生理条件下信号输出的稳定性。泛素-蛋白酶体通路(Ubiquitin Proteasome Pathway,UPP)作为真核细胞中选择性调节内源性蛋白质降解与功能的重要系统,它广泛参与了细胞周期调控、凋亡、信号转导、抗原提呈等多种生理过程,因而对维持细胞的稳态有着十分重要的意义。国内外研究发现,泛素-蛋白酶体通路功能的改变或异常可直接导致或诱发人类许多重要疾病。近年来研究表明,泛素-蛋白酶体抑制剂能够减轻或抑制实验性肝、肾、心脏、骨髓、皮肤和肺纤维化,但其具体的分子机制尚不十分清楚。MG132是一种醛基肽类泛素-蛋白酶体抑制剂,能够抑制细胞中不同类型蛋白酶的活性,从而阻断靶蛋白的泛素化降解,目前在实验研究中得到广泛应用。目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化的影响及可能的分子机制方法(1)体外培养人肺成纤维细胞MRC-5。(2)MTS法检测TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5增殖活性的影响。(3)以人肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,随机分为3组:对照组(未加入TGF-β1或MG132);TGF-β1组(10 ng/mL);MG132组[TGF-β1(10 ng/mL)+MG132(0.5μmol/L)]。(4)Western blot方法检测各组细胞中α-SMA和I型胶原α1(collagen type I alpha 1,COL1A1)的表达情况。(5)RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞中TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2、Smad3、Smad7及核转录共抑制因子Sno N的mRNA及蛋白表达情况。结果(1)TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5的增殖具有明显促进作用,且10ng/ml为最佳作用浓度;同时TGF-β1对人肺成纤维细胞MRC-5表现出明显的抗增殖抑制作用。(2)与对照组比较,TGF-β1组中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平明显增加(P0.05);与单纯TGF-β1刺激组比较,MG132组上述2种蛋白表达水平均有所下降(P0.05)。(3)与对照组比较,TGF-β1组和MG132组Smad7和Sno N mRNA的表达水平均有所增加(P0.05),而MG132组与单纯TGF-β1刺激组比较表达水平相仿(P0.05)。与mRNA表达水平相反,TGF-β1组Smad7和Sno N蛋白表达水平与对照组比较均有所减少(P0.05);与单纯TGF-β1刺激组比较,MG132组Smad7和Sno N蛋白表达水平均有所增加(P0.05)。(4)TGF-β1组和MG132组TβRI mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均有所增加(P0.05),而MG132组与单纯TGF-β1刺激组比较其表达水平相仿(P0.05)。(5)三组细胞Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平相仿(P0.05)。结论(1)TGF-β1对人肺成纤维细胞具有促进增殖及抗增殖抑制作用;(2)泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对TGF-β1活化人肺成纤维细胞具有抑制作用;(3)泛素-蛋白酶体抑制剂MG132可能通过阻止Smad7和Sno N蛋白的泛素化降解,而增强对人肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路的抑制作用,进而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

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