过表达Notch配体Delta-like基因的MLO-Y4骨细胞株的建立及其对骨髓基质细胞成骨分化的作用

发布时间：2024-05-22 04:47

　　目的建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响。方法用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分别稳定表达Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株。采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)对筛选出来的MLO-Y4骨细胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表达进行鉴定。将3种细胞株分别与野生型小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行共培养,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量检测共培养3 d ALP活性变化;qPCR检测共培养3 d成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达水平,在使用Notch信号抑制剂DAPT后检测上述指标。结果与阴性对照组相比,Dll1、Dll3及Dll4转染组中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平显著增加(P<0.05)。共培养3 d后,...

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【部分图文】：

图5qPCR检测骨细胞中Delta-like基因的过表达对BMSC中Notch信号的影响

图4qPCR检测骨细胞中Delta-like基因的过表达对BMSC成骨相关标志基因表达的影响2.5DAPT抑制骨细胞中Delta-like基因过表达诱导的BMSC成骨分化

图6DAPT对骨细胞Delta-like基因过表达增强BMSC成骨分化中ALP活性的影响

而图7显示,在加入DAPT后MLO-Y4-Dll4组ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ显著降低(P<0.05),表明Notch经典信号在骨细胞Dll4引起的BMSC成骨分化中起到重要作用。虽然成骨分化被抑制,但与对照组相比,仍然促进了ALP的活性及成骨相关标志基因的表....

图7qPCR检测DAPT对骨细胞Delta-like基因过表达诱导的BMSC成骨分化中标志基因表达量的影响

图6DAPT对骨细胞Delta-like基因过表达增强BMSC成骨分化中ALP活性的影响图8qPCR检测DAPT对骨细胞Delta-like过表达激活的BMSCNotch信号的影响

图8qPCR检测DAPT对骨细胞Delta-like过表达激活的BMSCNotch信号的影响

图7qPCR检测DAPT对骨细胞Delta-like基因过表达诱导的BMSC成骨分化中标志基因表达量的影响2.6DAPT抑制骨细胞Delta-like基因过表达激活的BMSC中Notch信号

本文编号：3980418