蛋白质SUMO化酶在正常眼组织和重大眼疾模型中的分化表达
发布时间：2025-04-18 03:51
眼睛是人和动物的视觉器官,其主要包括角膜、晶状体和视网膜等结构,它们的异常发育会导致一系列重大眼睛疾病。白内障是最常见的致盲性疾病之一,其症状表现为眼睛晶状体出现浑浊进而导致视力下降。研究表明,自由基的损伤、晶状体上皮细胞凋亡和晶状体蛋白损伤是导致白内障发生的重要因素。目前治疗白内障最有效的方法是通过超声乳化手术并植入人工晶状体,但术后的并发症较严重。年龄相关性黄斑变性(AMD:Age-related Macular Degeneration)是由多因素诱发的老年性眼睛疾病,其特征是视网膜色素上皮细胞和感光细胞的死亡。根据是否有新生血管出现,它可以分为干性和湿性,虽然利用血管内皮生长因子的抑制剂能用来处理并缓解湿性黄斑变性,但无法治愈,而干性黄斑变性无法治疗。因此,探讨白内障和AMD的发病机理及可能的治疗靶点是关系到人类健康的重大科学问题。利用在小鼠动物模型进行白内障和AMD的研究具有重要科学意义。蛋白质SUMO化(Sumoylation)是指类泛素小分子修饰(small ubiquitin-like modifiers简称SUMOs)与其它蛋白相结合的过程。SUMO化已成为蛋白质翻译后...
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1. 蛋白质的SUMO化
1.1 SUMO化的发现
1.2 SUMO化小分子的种类
1.3 SUMO的结合位点和基序
1.4 SUMO化连接酶系统
1.5 SUMO化水解酶系统
1.6 SUMO化的功能
1.7 SUMO化与人类疾病
2. 眼睛的发育
2.1 晶状体的发育
2.2 视网膜的发育
3. 眼睛的重大致盲疾病
3.1 白内障
3.2 年龄相关性黄斑变性
第二章 蛋白质SUMO化酶系统在眼睛不同组织和不同细胞系中的分化表达
1. 实验材料、化学试剂及仪器设备
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
2. 实验方法
2.1 小鼠眼球解剖
2.2 细胞培养
2.3 Western blot(蛋白质免疫印迹法)
2.4 荧光定量PCR
3. 实验结果
3.1 五种SUMO化酶的mRNA在主要眼睛组织中的表达模式分析
3.2 五种SUMO化连接酶蛋白质在主要眼睛组织中的分化表达模式
3.3 五种SUMO化酶在眼睛五种常用细胞系中的mRNA和蛋白的表达分析
3.4 五种SUMO化酶在眼睛五种常用细胞系中的核质定位
4. 总结与讨论
第三章 蛋白质SUMO化酶在重大眼疾动物模型中的分化表达
1. 实验材料、化学试剂和实验仪器
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 实验仪器
2. 实验方法
2.1 UV和过氧化氢诱导的小鼠白内障模型
2.2 碘酸钠诱导的小鼠AMD模型
2.3 小鼠眼球石蜡切片HE染色
2.4 Western blot(蛋白质免疫印迹法)
2.5 荧光定量PCR
3. 实验结果
3.1 体外白内障模型的建立
3.2 体外白内障模型晶状体上皮细胞中SUMO化酶的mRNA表达水平变化分析
3.3 体外白内障模型晶状体上皮细胞中SUMO化酶的蛋白质表达水平变化分析
3.4 小鼠AMD模型的建立
3.5 小鼠AMD模型视网膜中SUMO化酶mRNA的表达水平变化的分析
3.6 小鼠AMD模型注射一天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
3.7 小鼠AMD模型注射两天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
3.8 小鼠AMD模型注射三天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
4. 总结与讨论
第四章 蛋白质SUMO化连接酶3 PIAS1对晶状体上皮细胞活性调控的功能分析
1. 实验材料、化学试剂和实验仪器
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 实验仪器
2. 实验方法
2.1 过氧化氢诱导αTN4-1细胞凋亡
2.2 PIAS1质粒构建
2.3 Crisp-Cas9构建PIAS1敲除的αTN4-1稳定细胞系
2.4 CellTiter-Glo发光细胞活性测定
3. 实验结果
3.1 在过氧化氢处理的条件下,αTN4-1细胞中PIAS1的模式表达
3.2 Crispr-Cas9技术质粒的选择
3.3 PIAS1敲除的αTN4-1细胞系的鉴定
3.4 敲除PIAS1在应激条件下对αTN4-1细胞有保护作用
3.5 表达载体的选择
3.6 过表达PIAS1在应激条件下能够促进αTN4-1细胞的凋亡
4. 总结与讨论
第五章 总结、讨论及研究展望
参考文献
博士期间撰写、发表的主要论文及获奖情况
致谢
本文编号：4040480
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1. 蛋白质的SUMO化
1.1 SUMO化的发现
1.2 SUMO化小分子的种类
1.3 SUMO的结合位点和基序
1.4 SUMO化连接酶系统
1.5 SUMO化水解酶系统
1.6 SUMO化的功能
1.7 SUMO化与人类疾病
2. 眼睛的发育
2.1 晶状体的发育
2.2 视网膜的发育
3. 眼睛的重大致盲疾病
3.1 白内障
3.2 年龄相关性黄斑变性
第二章 蛋白质SUMO化酶系统在眼睛不同组织和不同细胞系中的分化表达
1. 实验材料、化学试剂及仪器设备
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
2. 实验方法
2.1 小鼠眼球解剖
2.2 细胞培养
2.3 Western blot(蛋白质免疫印迹法)
2.4 荧光定量PCR
3. 实验结果
3.1 五种SUMO化酶的mRNA在主要眼睛组织中的表达模式分析
3.2 五种SUMO化连接酶蛋白质在主要眼睛组织中的分化表达模式
3.3 五种SUMO化酶在眼睛五种常用细胞系中的mRNA和蛋白的表达分析
3.4 五种SUMO化酶在眼睛五种常用细胞系中的核质定位
4. 总结与讨论
第三章 蛋白质SUMO化酶在重大眼疾动物模型中的分化表达
1. 实验材料、化学试剂和实验仪器
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 实验仪器
2. 实验方法
2.1 UV和过氧化氢诱导的小鼠白内障模型
2.2 碘酸钠诱导的小鼠AMD模型
2.3 小鼠眼球石蜡切片HE染色
2.4 Western blot(蛋白质免疫印迹法)
2.5 荧光定量PCR
3. 实验结果
3.1 体外白内障模型的建立
3.2 体外白内障模型晶状体上皮细胞中SUMO化酶的mRNA表达水平变化分析
3.3 体外白内障模型晶状体上皮细胞中SUMO化酶的蛋白质表达水平变化分析
3.4 小鼠AMD模型的建立
3.5 小鼠AMD模型视网膜中SUMO化酶mRNA的表达水平变化的分析
3.6 小鼠AMD模型注射一天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
3.7 小鼠AMD模型注射两天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
3.8 小鼠AMD模型注射三天的视网膜中SUMO化酶蛋白质的表达水平变化的分析
4. 总结与讨论
第四章 蛋白质SUMO化连接酶3 PIAS1对晶状体上皮细胞活性调控的功能分析
1. 实验材料、化学试剂和实验仪器
1.1 实验材料
1.2 化学试剂
1.3 实验仪器
2. 实验方法
2.1 过氧化氢诱导αTN4-1细胞凋亡
2.2 PIAS1质粒构建
2.3 Crisp-Cas9构建PIAS1敲除的αTN4-1稳定细胞系
2.4 CellTiter-Glo发光细胞活性测定
3. 实验结果
3.1 在过氧化氢处理的条件下,αTN4-1细胞中PIAS1的模式表达
3.2 Crispr-Cas9技术质粒的选择
3.3 PIAS1敲除的αTN4-1细胞系的鉴定
3.4 敲除PIAS1在应激条件下对αTN4-1细胞有保护作用
3.5 表达载体的选择
3.6 过表达PIAS1在应激条件下能够促进αTN4-1细胞的凋亡
4. 总结与讨论
第五章 总结、讨论及研究展望
参考文献
博士期间撰写、发表的主要论文及获奖情况
致谢
本文编号：4040480
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/4040480.html
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