N-（3-氧代十二烷酰基）-L-高丝氨酸内酯通过调控胞内钙离子的释放模式影响成骨细胞凋亡和分化

发布时间：2025-05-13 02:03

　　目的:群体感应（Quorum Sensing,QS）是指细菌通过感知菌群密度变化来调控自身重要基因表达的群体行为。N-（3-氧代十二烷酰基）-L-高丝氨酸内酯(N-（3-oxododecanoyl）-L-homoserine lactone,AHL)是最具代表性的一类群体感应分子,由铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,P.a）分泌。研究指出AHL对宿主细胞具有非常广泛的生物学调节作用。例如,AHL可通过损伤细胞线粒体或激活膜表面死亡受体来诱导细胞凋亡;AHL还有广泛的免疫调节功能诸如破坏上皮细胞连接、诱导免疫细胞趋化、激活核因子-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）介导的炎症反应。另一方面,口腔内存在多种细菌,通常情况下菌群之间相互平衡维持的共生关系并不致病,但在某些重症牙周炎和持续性根尖周病等以骨缺损为主要症状的口腔疾病中,机会致病菌P.a会被特征性的检出,且有学者提出牙周主要致病菌合并P.a感染显著增加了牙周病的炎症和骨破坏的程度,因此,P.a与骨损伤之间可能存在因果关系。此外,P.a常以生物膜的形式存在,有研究指出,AHL在P.a...

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:AHL对成骨细胞凋亡的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 仪器设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 AHL细胞培养液的配制及细胞处理
            2.2.3 细胞状态观察
            2.2.4 细胞活性测定
            2.2.5 TUNEL细胞凋亡检测
            2.2.6 蛋白提取及Western blotting
            2.2.7 线粒体膜电位去极化测定
            2.2.8 细胞荧光染色
            2.2.9 统计分析
    3 结果
        3.1 AHL抑制成骨细胞活性
        3.2 AHL诱导成骨细胞凋亡
        3.3 AHL诱导成骨细胞表达Cleaved-Caspase-3及Cleaved-PARP
        3.4 AHL在成骨细胞线粒体中的荧光共定位
        3.5 AHL导致成骨细胞线粒体膜电位去极化
        3.6 AHL诱导细胞色素c由线粒体内异位至细胞质中
    4 讨论
    5 结论
第二部分:AHL对成骨细胞分化的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 仪器设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 ALP染色
            2.2.2 ALP活性测定
            2.2.3 茜素红染色
            2.2.4 RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 统计分析
    3 结果
        3.1 AHL对成骨细胞状态的影响
        3.2 AHL对成骨细胞ALP染色和ALP活性的影响
        3.3 AHL对成骨细胞钙化结节形成的影响
        3.4 AHL对成骨分化标志基因表达的调控
    4 讨论
    5 结论
第三部分:AHL调节胞内钙离子释放模式影响成骨细胞凋亡和分化
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 仪器设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞荧光染色
            2.2.2 胞内Ca²⁺测定
            2.2.3 蛋白提取及Western blotting
            2.2.4 ALP染色、ALP活性及RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 统计分析
    3 结果
        3.1 AHL募集于成骨细胞ER并促进胞内Ca²⁺释放
            3.1.1 AHL在成骨细胞ER中的荧光共定位
            3.1.2 AHL诱导成骨细胞胞内Ca²⁺释放
        3.2 改变胞内Ca²⁺释放模式抑制AHL诱导的成骨细胞凋亡并部分恢复成骨细胞分化
            3.2.1 W7 改变AHL诱导下成骨细胞胞内Ca²⁺的释放模式
            3.2.2 W7抑制AHL诱导的成骨细胞凋亡
            3.2.3 W7部分解除了AHL对成骨细胞分化的抑制作用
    4 讨论
    5 结论
本研究创新型的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4045572