骨化三醇通过促进自噬降低内化于巨噬细胞的牙龈卟啉单胞菌活菌数量

发布时间：2025-05-27 22:47

　　目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是慢性牙周炎重要的可疑致病菌,并且可内化入各种宿主细胞内,进而参与全身性疾病的发生和发展过程。骨化三醇(1α,25-二羟维生素D3,1α,25（OH）₂D₃,以下简称1,25D)可通过促进自噬降低上皮细胞和单核细胞内P.gingivalis的数量。本研究进一步观察1,25D对内化于U937巨噬细胞P.gingivalis活菌数量的影响,并通过观察U937巨噬细胞内P.gingivalis与自噬体和溶酶体的共定位情况,U937巨噬细胞自噬形成情况等进一步探讨1,25D对U937巨噬细胞内P.gingivalis的作用和相关机制。方法:1、PMA诱导U937单核细胞系为巨噬细胞。2、抗生素保护法建立P.gingivalis内化U937巨噬细胞研究模型。3、RT-PCR法检测1,25D对内化U937巨噬细胞内P.gingivalis活菌数量的影响。4、1,25D及P.gingivalis对U937巨噬细胞自噬的影响。分别用P.gingivalis、1,2...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1 PMA诱导U937细胞分化为U937巨噬细胞。

将对数生长期的U937细胞接种于6孔板,细胞密度为2×105/mL,每孔2mL。加入PMA储存液(终浓度100ng/mL)至细胞培养孔,轻摇混匀,于37°C,5%CO2孵箱中培养48h。去除含PMA培养液,PBS冲洗3次,加入2ml培养液,培养24～48h后进行后续实....

图2 骨化三醇(1,25D)对P.gingivalis内化U937巨噬细胞自噬的影响实验流程图

综合2.2.4和2.2.5中的实验结果,如图2所示,P.gingivalis组及1,25D+P.gingivalis组分别加入MOI值100:1的P.gingivalis共培养6h后,建立P.gingivalis内化U937巨噬细胞模型。1,25D组及1,25D+P.gingi....

图3 自噬在骨化三醇(1,25D)对内化U937巨噬细胞P.gingivalis ATCC 33277活菌数量的影响实验流程图

实验流程图如图3所示。实验组和对照组分别加入MOI值100:1P.gingivalis,建立P.gingivalis内化巨噬细胞模型,对照组加入0.1%乙醇,实验组分别加入10-8mol/L1,25D、3-MA+0.1%乙醇、10-8mol/L1,25D+3-MA,18h....

图4 不同浓度骨化三醇(1,25D)对U937巨噬细胞内活菌数量的影响

不同浓度的1,25D作用于P.gingivalis内化后的巨噬细胞,RT-PCR法检测巨噬细胞内活菌相对数量,结果如图4,与对照组组比较,随1,25D浓度的增加,巨噬细胞内活菌相对数量逐渐减少。其中,10-12mol/L组、10-10mol/L组及10-8mol/L组与对照组相比....

本文编号：4047664