牙龈卟啉单胞菌胶原酶PrtC体外表达、纯化及功能初探

发布时间：2025-06-21 04:42

　　目的牙龈卟啉单胞菌是牙周主要致病菌之一,胶原酶蛋白Prt C是其主要致病因子之一,本研究以Prt C蛋白为研究对象,探讨来自两个不同牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC53977和ATCC33277的prt C基因能否在大肠杆菌体内获得可溶性表达、纯化以及功能初探。材料与方法全基因合成牙龈卟啉单胞菌Porphyromonas gingivalis ATCC 53977和Porphyromonas gingivalis ATCC 33277中prt C基因,分别构建重组表达载体p28-prt C和p29-prt C,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western blot鉴定、确定蛋白的聚集状态、酶解法验证胶原酶的功能。结果通过表达检测发现牙龈卟啉单胞菌ATCC 53977中的胶原酶蛋白Prt C未能在大肠杆菌体内获得可溶性表达。而牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277中的Prt C蛋白可以在大肠杆菌体内获得可溶性表达,于是成功构建了胶原酶蛋白Prt C原核表达载体,通过亲和层析和分子筛层析纯化出高纯度且较稳定的蛋白Prt C,并且交联实验证明它在溶液中以多聚体的形式存在,采用蒸汽扩散法...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3-2PrtC蛋白序列比对

安徽医科大学硕士学位论文243结果3.1PrtC蛋白的生物信息学分析P.gingivalisATCC53977菌株中的PrtC蛋白由330个氨基酸组成，分子量为37.4kDa，利用ProtParamtool（https://web.expasy.org/protparam/）预测....

图3-3prtC基因的PCR产物电泳Fig.3-3TheCloneofprtCgenefragment

安徽医科大学硕士学位论文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，载体线性化PCR产物经核酸电泳结果如图所示。将各自PCR产物回收后，使目的基因与载体之间发生同源重组，重组产物经转化，挑取单克隆并抽质粒，送公司测序。....

图3-3prtC基因的PCR产物电泳Fig.3-3TheCloneofprtCgenefragment

安徽医科大学硕士学位论文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，载体线性化PCR产物经核酸电泳结果如图所示。将各自PCR产物回收后，使目的基因与载体之间发生同源重组，重组产物经转化，挑取单克隆并抽质粒，送公司测序。....

图3-4菌液PCRFig.3-4TheelectrophoresisofPCRproductinbacterialfluid

安徽医科大学硕士学位论文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，载体线性化PCR产物经核酸电泳结果如图所示。将各自PCR产物回收后，使目的基因与载体之间发生同源重组，重组产物经转化，挑取单克隆并抽质粒，送公司测序。....

本文编号：4051930