TSC1/TSC2复合物失活抑制AKT的机制及其功能研究

发布时间：2025-07-09 06:48

　　目的结节性硬化症(TSC)是由两种抑癌基因TSC1或TSC2的功能性失活突变导致哺乳动物雷帕霉素靶点复合物1(m TORC1)的活化所引起。而且TSC1/TSC2复合物失活导致的m TORC1过度活化能够负反馈抑制AKT,这被认为是TSC多为良性肿瘤的主要原因之一。然而,这种负反馈调节的确切机制我们仍然不是很清楚,而我们的研究目的则是进一步阐明这种机制。方法在前期的研究工作中,我们通过基因芯片分析,发现与对照小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2+/+MEFs)相比,Tsc2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2-/-MEFs)中血小板源性生长因子受体α(PDGFRɑ)的表达明显下调。蛋白印记(WB)和实时定量PCR(q RT-PCR)进一步证实。并且雷帕霉素(rapamycin)处理或si Raptor干扰能够恢复Tsc2-/-MEFs中的PDGFRα的表达。接着我们构建PDGFRα过表达的Tsc2-/-MEFs或Tsc1-/-MEFs以及PDGFRα敲低的Tsc2+/+MEFs或Tsc1+/+MEFs,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力。将PDGFRα过表达的Tsc2-/-MEF...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 仪器耗材
        2.1.2 细胞系、质粒载体和菌株
        2.1.3 实验所需抗体、试剂
        2.1.4 使用引物序列及干扰RNA序列
        2.1.5 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 基因克隆及相关实验
        2.2.3 细胞转染
        2.2.4 病毒的获得及稳定转染细胞系的建立
        2.2.5 荧光素酶报告基因实验
        2.2.6 蛋白相关实验
        2.2.7 细胞总RNA的提取
        2.2.8 cDNA第一链的合成
        2.2.9 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）反应
        2.2.10 激光共聚焦
        2.2.11 细胞增殖实验
        2.2.12 动物实验
        2.2.13 免疫组织化学实验
        2.2.14 统计分析
3 结果
    3.1 mTORC1负调控PDGFRα
    3.2 PDGFRα下调阻碍Tsc1或Tsc2缺陷细胞的增殖和肿瘤发生
    3.3 PDGFRα激活AKT
    3.4 mTORC1负调控FOXO3a
    3.5 mTORC1通过抑制FOXO3a下调PDGFRα/AKT信号通路
    3.6 在体内和体外联合使用雷帕霉素与AG1295抑制TSC1/TSC2复合物缺乏的细胞的生长
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：4057336