siRNA沉默ASPP2基因对人角质形成细胞HaCaT细胞迁移和增殖的影响

发布时间：2025-05-05 02:09

　　目的：P53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein2of p53，ASPP2）是二十一世纪初发现的与细胞凋亡有关的蛋白，属于P53家族。国内外研究发现ASPP2有多种生物活性，它能促进凋亡基因转录从而发挥抑制肿瘤的作用。近年来发现它不仅与凋亡有关，而且能与Par3协同调节细胞极性。本研究采用小干扰RNA(small interfering RNA)技术下调人永生化角质形成细胞株（thespontaneously immortalized human skin keratinocyte cell line，HaCaT cell）中ASPP2基因表达，检测HaCaT细胞迁移、增殖的变化，初步探究ASPP2蛋白在HaCaT细胞中所起的生物学作用，为银屑病皮损形成的深入研究提供依据。 方法：①我们应用阳离子脂质体LipofectaminTM2000瞬时转染法，将四种不同的浓度的siRNA分别转染至人永生化角质形成细胞株内，通过蛋白印迹的方法测定各组细胞中ASPP2蛋白表达的情况来检测转染效率，选择最佳转染效率。②将细胞用2种不同的siRNA和对照siRNA...

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Abstract
英文缩略词表
前言
第一章 材料与方法
    1.1 细胞和 siRNA 来源
    1.2 主要试剂
    1.3 主要试剂盒和设备
    1.4 试验方法
        1.4.1 主要试剂组成成分
        1.4.2 对 HaCaT 细胞进行蛋白 ASPP2 的干扰
        1.4.3 细胞培养条件
        1.4.4 细胞划痕实验
        1.4.5 溶解细胞提取蛋白
        1.4.6 BCA 法蛋白定量
        1.4.7 SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳
        1.4.8 蛋白质转到 NC 膜
        1.4.9 Western blot
        1.4.10 二维培养细胞的免疫荧光
        1.4.11 细胞生长曲线的绘制
    1.5 统计处理
第二章 实验结果
    2.1 确定 HaCaT 细胞转染条件
    2.2 蛋白 ASPP2 表达降低后对 HaCaT 细胞迁移的影响
        2.2.1 蛋白 ASPP2 siRNA 转染后 HaCaT 细胞划痕实验
        2.2.2 确定划痕实验后 HaCaT 细胞中蛋白 ASPP2 的表达
    2.3 蛋白 ASPP2 在 HaCaT 细胞迁移过程中的定位
    2.4 蛋白 ASPP2 表达降低后对 HaCaT 细胞增殖的影响
        2.4.1 蛋白 ASPP2 siRNA 转染后 HaCaT 细胞增殖实验
        2.4.2 确定转染后 HaCaT 细胞中蛋白 ASPP2 在不同时间点的表达
第三章 讨论
第四章 结论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表论文情况
致谢
个人简历



本文编号：4042956