hTERT pre-mRNA选择性剪接在调控胶质瘤端粒酶活性中作用的研究

发布时间：2025-07-07 06:48

　　研究目的:端粒是控制细胞增殖与衰老凋亡的生物钟,分化成熟的正常人体细胞不表达端粒酶,因次端粒随细胞分离次数增加逐渐缩短。端粒酶异常再表达及活化与细胞恶性转化密切相关,约90%以上恶性肿瘤有端粒酶再表达及活化。人端粒酶逆转录酶(hTERT)是人端粒酶的催化亚单位及决定其活性的关键因素。hTERT对端粒酶活性的调控分为转录水平调控和hTERT pre-mRNA选择性剪接调控,即转录后水平调控。α和β两个位点的缺失是目前hTERT pre-mRNA剪接调控中研究较多的位点。hTERT pre-mRNA序列上存在着外显子剪接增强子(ESE)序列,反义寡核苷酸与之相结合可诱导外显子跳跃,改变选择性剪接模式。本研究应用反义寡核苷酸与hTERT pre-mRNA中的外显子剪接增强子结合,调控其剪接模式,减少全长型hTERT mRNA的表达,抑制端粒酶活性,从而影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。旨在探讨hTERT pre-mRNA的选择性剪接对端粒酶活性的调节作用,为新一代端粒酶抑制剂研发提供新思路及参考依据。研究方法:第一部分:以胶质瘤细胞系和胶质瘤组织标本为研究对象,采用RT-PCR方法检测hTER...

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１选择性剪接的种类和方式，产生多种蛋白质产物

选择性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ）又被称为可变剪接或变位剪接，是指真核细??胞中基因转录形成的初始ｍＲＮＡ?（ｐｒｅ－ｍＲＮＡ），通过不同剪接方式产生不同拼接??形式的成熟ｍＲＮＡ剪接变异体（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｖａｒｉａｎｔｓ，ＡＳＶｓ....

图２?ｈＴＥＲＴ?ｐｒｅ－ｍＲＮＡ选择性剪接模式图

各种ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶｓ的作用和功能尚不十分清楚。ａ缺失（－ａ）?ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶ??缺失外显子６中的３６个核巧酸；Ｐ缺失（－Ｐ）?ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶ缺失了全部外显子７??和全部外显子８的１８２个核巧酸（ａ和Ｐ缺失位点如图２所示）；Ｙ缺失ｈＴＥＲＴ??ＡＳＶ缺失了外显子１１中的....

图３端粒酶抑制剂ＧＲＮｌ抗Ｌ的化学结构??３．外显子跳跃（Ｅｘｏｎ－ｓｋｉｐｐｉｎｇ）技术及其应用：??与外显子增强子（ｅｘｏｎ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｅｎｈａｎｃｅｒ，?ＥＳＥ）序列互补的反义寡核昔酸??

端粒酶抑制剂ＧＲＮ１６３Ｌ通过特异性与端粒酶模板ＲＮＡ活性部位结合抑制??端粒酶活性，现在己经进入了?Ｉ／ＩＩ期临床试验阶段。临床前研究表明，ＧＲＮ１６３Ｌ??的体内端粒酶活性抑制率可达到５０－７５％，?ＧＲＮ１６３Ｌ的化学结构详见图３。尽管??在某些恶性肿瘤患者用ＧＲＮ１６３Ｌ....

图４反义寡棱脊酸（ＡＯ）调控选择性剪接外显子跳跃（ｅｘｏｎ?ｓｋｉｐｐｉｎｇ）的原理

（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ?ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，?ＡＯ），可Ｗ改变转录后ｐｒｅ－ｍ民ＮＡ的选择性剪接位点的??使用，从而改变剪接模克介导外显子跳跃。ＡＯ调控选择性剪接外显子跳跃的??原理如图４所示。它是一种新的基因治疗技术，已经应用在临床试验中治疗杜巧??肌营养不良（ＤＭＤ....

本文编号：4056672