腺苷激酶在创伤性脑损伤中对神经元凋亡的作用研究

发布时间：2025-07-19 05:00

　　目的研究腺苷激酶(adenosine kinase, ADK)在创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)中的表达变化,并探讨ADK参与星形胶质细胞活化及神经元凋亡的机制。 方法 1.整体水平,建立大鼠脑锐器割伤模型;通过蛋白质印迹法(Western Blot, WB)和免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)检测TBI中ADK的表达和分布变化。 2.通过免疫荧光双标记法(double-immunofluorescent staining,1F)检测ADK在TBI中与不同细胞的共定位情况。 3.通过WB检测TBI后GFAP. Ki-67及iNOS的表达,并通过1F分别检测Ki-67/GFAP及Ki-67/ADK的共定位情况,以明确ADK与星形胶质细胞活化的关系。 4.采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测TB1后大鼠皮质神经元的凋亡情况。 5.离体水平,建立脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的星形胶质细胞活化模型,通过WB检测ADK、GFAP、iNOS的表达变化,并通过ELI...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 课题来源、研究的目的和意义
    1.2 国内外研究概况
        1.2.1 国外研究概况
        1.2.2 国内研究概况
    1.3 论文的主要研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 研究资料及仪器设备
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验流程与方法
        2.2.1 大鼠颅脑锐器割伤模型的建立
        2.2.2 用于蛋白定量分析的组织取材
        2.2.3 用于脑切片的组织取材
        2.2.4 原代星形胶质细胞培养及炎症模型的建立
            2.2.4.1 原代星形胶质细胞培养
            2.2.4.2 LPS诱导星形胶质细胞炎症模型的建立
        2.2.5 原代神经元培养及凋亡模型的建立
            2.2.5.1 原代神经元的培养
            2.2.5.2 CM诱导原代神经元凋亡的模型建立
        2.2.6 Western Blot
            2.2.6.1 组织蛋白提取及处理
            2.2.6.2 细胞蛋白提取
            2.2.6.3 SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白质免疫检测
        2.2.7 免疫组织化学染色
        2.2.8 组织免疫荧光双标记
        2.2.9 TUNEL法检测凋亡
        2.2.10 细胞免疫荧光双标记
        2.2.11 ELISA
        2.2.12 细胞毒性检测
        2.2.13 ADK siRNA oligo的获取
        2.2.14 ADK siRNA oligo转染
        2.2.15 数据处理
            2.2.15.1 免疫组织化学细胞计数
            2.2.15.2 免疫荧光双标细胞计数
            2.2.15.3 统计学处理
第三章 结果
    3.1 ADK在TBI后的表达及分布变化
        3.1.1 Western Blot检测TBI中ADK表达变化
        3.1.2 免疫组织化学染色检测TBI中ADK的分布变化
    3.2 TBI后ADK的细胞定位变化
    3.3 TBI后损伤侧皮质发生神经元凋亡和星形胶质细胞活化
        3.3.1 TUNEL法检测TBI后神经元凋亡
        3.3.2 TBI后星形胶质细胞活化的情况
    3.4 ADK在LPS诱导的活化星形胶质细胞中表达增加
    3.5 星形胶质细胞活化导致神经元凋亡
    3.6 ADK减少原代星形胶质细胞炎性因子的释放
    3.7 ADK参与胶质细胞活化介导的神经元凋亡
第四章 讨论
    4.1 TBI中存在星形胶质细胞神经元调控
    4.2 ADK参与TBI后星形胶质细胞活化
    4.3 ADK调控星形胶质细胞释放炎性因子
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
    综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
    A：在国内外刊物上发表的论文
    B：所参加的学术会议
    C：所参加的项目
致谢
附录：攻读学位期间获得的主要荣誉



本文编号：4058029