移植术后的角膜衰老对角膜移植免疫排斥的影响及其机制研究

发布时间：2025-06-24 06:16

　　目的:通过构建小鼠穿透性角膜移植模型探讨角膜植片细胞衰老对角膜移植免疫排斥反应的影响及机制。方法:1、小鼠角膜移植免疫排斥期间的细胞衰老表型分析。分别以BALB/C或C57BL/6小鼠为角膜供体,BALB/C小鼠为角膜受体构建穿透性角膜移植模型,分为正常组、同系角膜移植组和异系角膜移植组,于移植免疫排斥反应阶段收集角膜样本。通过衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal）染色明确角膜植片的细胞衰老表型,并借助角膜植片冰冻切片分析衰老细胞在角膜中的分布;使用Western Blot分析角膜植片中衰老相关蛋白p16、p21的表达水平。2、供体角膜衰老相关基因p16缺失对小鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。分别将野生型和p16缺失型的C57BL/6小鼠作为角膜供体构建异系角膜移植模型,评价角膜供体细胞衰老对角膜移植免疫排斥反应的影响:通过裂隙灯观察角膜移植免疫排斥反应并记录角膜植片存活时间;通过免疫荧光实验评估不同组别角膜植片中炎性细胞的浸润情况。3、抗衰老药物ABT-263清除衰老细胞对小鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。建立...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.角膜移植免疫排斥期间存在细胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和异系(Allo)移植组角膜移植免疫排斥期间角膜植片细胞衰老染色结果;(B)三组角膜植片SAβ-Gal染色冰冻切片,观察细胞衰老表达与分布;(C)Western Blot检测三组小鼠角膜植片衰老蛋白p16及p21的表达情况。

2、初步明确衰老细胞可通过刺激抗原递呈细胞活化促进角膜移植免疫排斥反应。图2.供体角膜衰老相关基因p16缺失对小鼠角膜移植免疫排斥反应的影响(A)正常野生型(WT)角膜供体异系移植组和p16缺失型(p16KO)角膜供体异系移植组术后2周眼前节大体相;(B)Kaplan-Meier....

图2.供体角膜衰老相关基因p16缺失对小鼠角膜移植免疫排斥反应的影响(A)正常野生型(WT)角膜供体异系移植组和p16缺失型(p16KO)角膜供体异系移植组术后2周眼前节大体相;(B)Kaplan-Meier生存分析比较两组小鼠角膜移植术后植片存活情况;(C)免疫荧光检测两组术前及角膜移植免疫排斥期间角膜植片中CD45+炎性细胞的浸润情况。

图1.角膜移植免疫排斥期间存在细胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和异系(Allo)移植组角膜移植免疫排斥期间角膜植片细胞衰老染色结果;(B)三组角膜植片SAβ-Gal染色冰冻切片,观察细胞衰老表达与分布;(C)WesternBlot检测三组小鼠角膜植片衰老蛋白p1....

图3.抗衰老药物ABT-263可有效清除衰老细胞(A)使用SAβ-Gal染色检测正常小鼠(Con)、异系移植(Allo)和异系移植并ABT-263干预组(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情况;(B)使用RT-PCR检测正常、异系移植和异系移植并ABT-263干预组角膜植片中衰老相关基因p16、p21表达情况,**P<0.01、***P<0.001。

图2.供体角膜衰老相关基因p16缺失对小鼠角膜移植免疫排斥反应的影响(A)正常野生型(WT)角膜供体异系移植组和p16缺失型(p16KO)角膜供体异系移植组术后2周眼前节大体相;(B)Kaplan-Meier生存分析比较两组小鼠角膜移植术后植片存活情况;(C)免疫荧光检测两组术前....

图4.清除衰老细胞可以抑制或减轻角膜移植免疫排斥反应(A)异系移植组(Allo)、异系移植并ABT-263干预组(Allo+ABT-263)术后2周眼前节大体相;(B)Kaplan-Meier生存分析比较两组小鼠角膜移植术后植片存活情况;(C)RT-PCR检测正常小鼠(Con)、异系移植(Allo)、异系移植并ABT-263干预组(Allo+ABT-263)的角膜植片中主要炎性相关因子IL-1β、IL-17A、TNF-α、IFN-γ表达情况,*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。

图3.抗衰老药物ABT-263可有效清除衰老细胞(A)使用SAβ-Gal染色检测正常小鼠(Con)、异系移植(Allo)和异系移植并ABT-263干预组(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情况;(B)使用RT-PCR检测正常、异系移植和异系移植并ABT-263干预组角膜植片....

本文编号：4052611