前列腺素E 2 受体信号转导在大鼠免疫性肝纤维化和肝星状细胞胶原合成中的作用及黄芪甲苷对其影响

发布时间：2025-06-04 05:32

　　肝纤维化是指由多种慢性疾病引起的肝脏持续创伤修复反应而导致的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积。严重的肝纤维化导致肝硬化并引起肝功能衰竭,门静脉高压甚至需要肝脏移植治疗。长期以来广泛持续的肝纤维化被认为是不可逆转的,而越来越多的研究证据表明,肝纤维化甚至肝硬化都有逆转的可能。对肝纤维化细胞及分子机制的研究表明,多种细胞参与了肝纤维化的形成,其中激活的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）被认为是促进ECM过度沉积的主要细胞,而多种细胞因子参与了肝星状细胞的激活,其中转化生长因子β₁（transforming growth factor,TGF-β₁）被认为是最关键的因素之一。其可激活HSCs和调节ECM的合成和降解平衡。以干扰HSCs中TGF-β₁及其细胞信号转导通路为靶点的抗肝纤维化治疗已成为当今研究的热点之一。而在肝纤维化及其胶原合成过程中,除TGF-β₁及其细胞信号转导通路外,尚有其他信号途径参与。前列腺素E₂

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【学位级别】：博士

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1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物和细胞
        2.1.2 药物及试剂
        2.1.3 仪器与设备
    2.2 实验内容与方法
        2.2.1 猪血清诱导大鼠免疫性肝纤维化模型的建立
        2.2.2 实验分组及给药方案
        2.2.3 大鼠肝星状细胞(HSCs)及的分离与培养
        2.2.4 大鼠HSCs细胞增殖和胶原合成的检测方法
        2.2.5 血清转氨酶活性测定
        2.2.6 羟脯氨酸(Hyp)含量测定
        2.2.7 血清透明质酸(HA)、层连蛋白(LN)含量的测定
        2.2.8 血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)测定
        2.2.9 MDA含量测定
        2.2.10 SOD活性测定
        2.2.11 GSH-px活性测定
        2.2.12 TNF-α和IL-1β水平测定
        2.2.13 血清TGF-β₁水平的测定
        2.2.14 PGE₂水平测定
        2.2.15 肝脏病理组织学观察及评分标准
        2.2.16 肝脏免疫组织化学法检测肝脏组织TGF-β₁表达
        2.2.17 蛋白免疫印迹法检测Smad3、Smad7及EP₂蛋白表达
        2.2.18 PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡分析
        2.2.19 Caspase-3活性检测
        2.2.20 HSCs细胞内cAMP水平的测定
        2.2.21 统计学处理
3.结果
    3.1 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化的保护作用
        3.1.1 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠的保护作用
        3.1.2 AGS-Ⅳ对对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝脏病理组织学的影响
        3.1.3 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝匀浆Hyp影响
        3.1.4 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ含量的影响
        3.1.5 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝匀浆MDA,SOD和GSH-Px水平的影响
        3.1.6 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠血清TGF-β₁水平的影响
        3.1.7 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝脏组织TGF-β₁表达的影响
        3.1.8 AGS-Ⅳ对肝纤维化大鼠HSCs增殖及胶原合成的影响
    3.2 AGS-Ⅳ对HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响及对HSCsTGF-β₁/Smads信号通路的影响
        3.2.1 体外不同浓度AGS-Ⅳ对HSCs的毒性作用
        3.2.2 AGS-Ⅳ对PDGF-BB刺激体外培养HSCs增殖的影响
        3.2.3 AGS-Ⅳ诱导HSCs凋亡的作用
        3.2.4 AGS-Ⅳ对HSCs caspase-3活性的影响
        3.2.5 AGS-Ⅳ对TGF-β₁诱导HSCs胶原合成的影响
        3.2.6 AGS-Ⅳ对HSCs中Smad3及Smad7表达的影响
    3.3 PGE₂-EP₂-cAMP在猪血清诱导肝纤维化大鼠和HSCs胶原合成中的作用及AGS-Ⅳ对其影响
        3.3.1 猪血清诱导肝纤维化大鼠血清PGE₂水平的变化
        3.3.2 猪血清诱导肝纤维化大鼠HSCs表达EP₂水平的改变
        3.3.3 降低PGE₂及EP₂表达对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝脏组织学影响
        3.3.4 PGE₂水平的降低对猪血清诱导肝纤维化大鼠血清ALT活性、TNF-α和IL-1β水平的影响
        3.3.5 PGE₂及EP₂受体激活剂对HSCs胶原合成的影响
        3.3.6 PGE₂及EP₂受体激动剂HSCs cAMP水平的影响
        3.3.7 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠HSCs中EP₂受体表达的影响
        3.3.8 AGS-Ⅳ对TGF-β₁刺激HSCs中EP₂受体表达的影响
        3.3.9 AGS-Ⅳ对TGF-β₁刺激HSCs cAMP水平的影响
4.讨论
    4.1 AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化大鼠的保护作用
    4.2 AGS-Ⅳ对HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响
    4.3 AGS-Ⅳ对HSCsTGF-β₁/Smads信号通路的影响
    4.4 血清PGE₂水平及HSCs中EP₂表达的变化及其对猪血清诱导肝纤维化大鼠影响
5.结论
    5.1 AGS-Ⅳ对猪血清诱导大鼠肝纤维化具有良好的保护作用
    5.2 AGS-Ⅳ可抑制HSCs的增殖、诱导HSCs凋亡,并通过调节TGFβ/Smads信号通路抑制其胶原合成
    5.3 PGE₂-EP₂-cAMP在猪血清诱导肝纤维化大鼠及HSCs胶原合成中的作用及AGS-Ⅳ对其影响
参考文献
本研究的创新点
个人简介
致谢
综述:肝纤维化及以肝星状细胞TGF-β₁信号转导为靶点的治疗



本文编号：4049390