miR-16用于TNBS诱导的小鼠炎症性肠病的治疗

发布时间：2025-06-21 02:46

　　炎症性肠病(IBD)是一种常见的自身免疫功能紊乱疾病,其发病机制尚未研究清楚,现有的治疗手段很难将其完全根除。近年来发现一类长度约为21-25个核苷酸的非编码单链微小核糖核酸(microRNA, miRNA)在IBD发生发展过程中扮演着极其重要的角色,提示这种新型的微小核糖核酸可望作为药物作用靶点或潜在的核酸药物应用于IBD的治疗。 本论文中,我们用三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠炎症性肠病来模拟人的炎症性肠病——克罗恩病,研究miR-16作为潜在核酸药物对IBD的治疗功效。首先,我们研究了miR-16的可能作用靶点。肿瘤坏死因子(TNF-a)和白细胞介素12,23所共有的亚基IL-12p40中富含AU元件(AU-rich element,AREs)的3’端非编码区(3'-UTR)分别被构建到荧光素酶表达载体中。我们通过荧光素酶报告实验研究了miR-16和TNF-α3'-UTR的结合能力以及miR-16和IL-12p403’-UTR的结合能力。另外,通过向活化的腹腔巨噬细胞转入miR-16的前体或抑制剂,研究miR-16对TNF-a和IL-12p40这两种分泌蛋白的影响。实验结果表明...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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英文缩写及名词对照
摘要
Abstract
综述部分
    一、炎症性肠病概述
        1.1 炎症性肠病简介
        1.2 炎症性肠病的临床症状
        1.3 炎症性肠病的致病机理
        1.4 炎症性肠病的治疗现状
        1.5 炎症性肠病的动物模型
    二、microRNA 概述
        2.1 miRNA 简介
        2.2 miRNA与免疫应答
        2.3 miRNA与炎症性肠病
    三、细胞因子在炎症性肠病中的作用
        3.1 细胞因子概述
        3.2 细胞因子与IBD
        3.3 细胞因子的调控
    参考文献
实验部分
    一、引言
    二、实验仪器和材料
        2.1 实验仪器
        2.2 实验材料
    三、实验方法
        3.1 荧光素酶报告载体的构建
            3.1.1 重组荧光素酶报告载体构建
            3.1.2 突变荧光素酶报告载体构建
        3.2 细胞内荧光素酶实验
            3.2.1 细胞转染实验
            3.2.2 Luciferase测定
            3.2.3 p-gal测定
        3.3 小鼠腹腔巨噬细胞的提取
        3.4 ELISA检测促炎因子表达水平
        3.5 给药载体的合成
        3.6 免疫荧光
        3.7 TNBS小鼠肠炎模型构建
        3.8 结肠组织中基因表达水平的检测
        3.9 TNBS小鼠肠炎模型的治疗
        3.10 病理分析
    四、实验结果和讨论
        4.1 靶点预测
        4.2 体外靶点验证
        4.3 TNBS小鼠肠炎模型构建
        4.4 G-LMWC/pre miR-16特异性靶向结肠巨噬细胞
        4.5 miR-16用于TNBS诱导小鼠炎症性肠病的治疗
            4.5.1 结肠组织中因子mRNA水平的变化
            4.5.2 ELISA以及免疫荧光结果
            4.5.3 疗效相关指标
            4.5.4 HE病理切片结果
            4.5.5 一系列炎症因子表达水平变化
    五、小结
    参考文献
致谢



本文编号：4051794