Let-7f靶向抑制A20表达在血管内皮细胞炎症反应中的作用研究

发布时间：2025-05-26 23:02

　　 目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达变化情况,RT-qPCR检测不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时let-7f的表达变化规律,Western blot法分析不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时核因子κB(NF-κB)的核移位情况和ox-LDL对人脐静脉内皮细胞A20表达及NF-κB通路活化的影响,双荧光素酶报告实验检测let-7f与A20基因的3’-UTR靶向结合,Western blot法检测let-7f对A20表达的调控。结果 20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞培养液中ICAM-1的含量明显升高,血管内皮细胞let-7f的表达明显上调(均为P<0.05),且随着ox-LDL作用剂量的增加,ICAM-1与let-7f的表达变化均呈现明显的剂量效应关系。此外,20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞NF-κB向核内移位,随着ox-L...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养和转染
        1.2.2 分组
        1.2.3 RNA的提取和实时荧光定量PCR
        1.2.4 双抗体夹心ELISA方法检测细胞培养液ICAM-1含量
        1.2.5 细胞核蛋白的制备
        1.2.6 Western blot法检测细胞核中NF-κB含量的变化
        1.2.7 Western blot法检测细胞中A20、p-IKK、NF-κB和p-NF-κB的变化
        1.2.8 双荧光素酶报告实验验证let-7f与A20的靶向关系
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 ox-LDL对HUVEC细胞ICAM-1表达的影响
    2.2 ox-LDL对HUVEC细胞let-7f表达的影响
    2.3 ox-LDL对HUVEC细胞核NF-κB蛋白含量的影响
    2.4 ox-LDL对HUVEC细胞A20表达及NF-κB通路的影响
    2.5 let-7f与A20基因3’-UTR靶向结合并抑制其表达
3 讨论



本文编号：4047113