长链非编码RNA-GAS5对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究

发布时间：2025-06-04 00:41

　　目的:急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）是冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary heart disease,CHD）中最危急和最严重的类型,临床治疗指南推荐尽快开通闭塞血管使冠状动脉恢复血流为最佳治疗手段。然而,当血管开通使心肌得到再灌注时,有些患者却出现心律失常、血管无复流、心肌坏死范围扩大等心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）的现象,随着再灌注手段的发展与应用,再灌注损伤的现象越来越得到重视。再灌注损伤的发生机制十分复杂,再灌注过程中一些因素激活细胞凋亡、坏死等多条信号转导通路,最终导致心肌的损伤、坏死。随着对基因研究的深入以及生物信息学的发展,长链非编码RNA（Long non-coding RNAs,LncRNAs）被发现可以直接或间接调控编码蛋白基因或蛋白,成为近几年心肌缺血再灌注损伤机制及防治的研究热点。寻找参与调控的LncRNA并深入研究调控机制成为防治心肌缺血再灌注损伤的一个新的切入点。LncRNA GAS5（growth arrest specifi...

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:LncRNA GAS5 在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达及作用研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验细胞
            2.1.2 实验动物
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要试剂
            2.1.5 引物序列
            2.1.6 siRNA序列
        2.2 方法
            2.2.1 相关溶液的配制
            2.2.2 动物离体心肌缺血再灌注损伤模型的建立
            2.2.3 实验动物分组
            2.2.4 H9c2心肌细胞培养
            2.2.5 心肌细胞缺氧复氧模型的建立
            2.2.6 细胞转染
            2.2.7 细胞实验分组
            2.2.8 CCK-8细胞活性检测
            2.2.9 LDH活性测定
            2.2.10 CK-MB活性测定
            2.2.11 GSH活性测定
            2.2.12 Hoechst染色
            2.2.13 流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况
            2.2.14 Western blot分析
            2.2.15 总RNA提取
            2.2.16 提纯RNA及定量
            2.2.17 逆转录
            2.2.18 Real-time PCR
            2.2.19 统计分析
    3 结果
        3.1 GAS5 在大鼠IR心肌组织和HR心肌细胞中上调表达
        3.2 GAS5对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响
            3.2.1 沉默GAS5表达对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响
            3.2.2 沉默GAS5表达对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分:LncRNA GAS5在H9c2 缺氧复氧损伤中通过竞争性结合miR-532 调控PI3K/AKT通路
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验细胞
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 引物序列
            2.1.5 miRNA mimic/inhibitor序列
        2.2 方法
            2.2.1 细胞转染
            2.2.2 细胞实验分组
            2.2.3 CCK-8细胞活力检测
            2.2.4 LDH活性测定
            2.2.5 GSH活性测定
            2.2.6 CK-MB活性测定
            2.2.7 流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况
            2.2.8 Realtime PCR
            2.2.9 Western blot分析
            2.2.10 生物信息分析
            2.2.11 荧光素酶报告基因
            2.2.12 统计分析
    3 结果
        3.1 预测GAS5 的下游靶基因及ceRNA调控网络
        3.2 GAS5、miR-532-5p、PTEN在 H9c2 缺氧复氧损伤的表达及相互作用关系
        3.3 荧光素酶实验验证GAS5与miR-532-5p、miR-532-5p与PTEN结合位点
        3.4 miR-532-5p对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响
        3.5 GAS5、miR-532-5p可调控PTEN的蛋白表达
        3.6 GAS5 作为ceRNA结合miR-532-5p在 HR损伤中调控PI3K/AKT通路
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 长链非编码RNA在缺血性心脏病中调控的研究进展
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4049058