葫芦素B抑制视网膜母细胞瘤细胞生长的实验研究

发布时间：2025-05-20 07:07

　　 目的研究葫芦素B对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞凋亡的影响及作用机制。方法将体外培养的RB细胞分为对照组、低、中、高浓度葫芦素B组,MTT法测定细胞增殖率,Hoechst 33342/PI双染观察细胞凋亡,Annexin V/PI检测凋亡,镜观察细胞内结构改变,蛋白质印迹法检测Bax及Bcl-2蛋白相对表达量。结果葫芦素B剂量依赖性的抑制了RB细胞生长并诱导凋亡;葫芦素B干预后RB细胞胞浆浓缩,细胞器结构破坏,细胞核染色质凝结成块并固缩;蛋白质印迹结果显示,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。结论葫芦素B通过改变线粒体凋亡途径中凋亡相关信号分子的表达,促进RB细胞凋亡。

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【部分图文】：

图1 葫芦素B对RB细胞增殖率的影响 (**示P<0.01)

MTT结果显示,对照组细胞增殖率为96.33%,不同浓度葫芦素B干预RB细胞48h后,其OD值均明显降低(P<0.01,图1),RB细胞增殖率逐渐下降。二、葫芦素B促进RB细胞凋亡及坏死

图2 葫芦素B对RB细胞凋亡及坏死的影响

Hoechst33342染液能够穿透正常细胞的细胞膜,染色后呈弥散的低蓝光,对于凋亡细胞,Hoechst33342染液后呈亮蓝色;PI不能穿透正常细胞的胞膜,但可以穿透坏死细胞的细胞膜,荧光显微镜检测时,被PI染液染色的细胞呈现红色荧光。我们的观察结果显示,伴随葫芦素B浓度增加,....

图3 葫芦素B对RB细胞凋亡率的影响 (**示P<0.01)

为了进一步检测葫芦素B促进RB细胞凋亡率的影响,我们采用流式细胞技术方法测定了不同组别的细胞凋亡率,实验中使用的为AnnexinV-FITC/PI双染色检测试剂盒。结果显示,对照组RB细胞凋亡率为(2.57±1.43)%,随着葫芦素B作用浓度的递增,RB细胞凋亡率也呈剂量依赖性....

图4 葫芦素B对RB细胞内结构影响的电镜观察

对照组RB细胞细胞核结构清晰易辨。葫芦素B干预后RB细胞胞浆浓缩,细胞核染色质凝结聚集在核膜周边,呈新月状或环状小体改变,葫芦素B高浓度组细胞浆肿胀明显,可以观察到空泡结构,部分细胞细胞膜不完整,内质网变疏松并与胞膜融合形成空泡(图4)。五、葫芦素B促进线粒体凋亡信号通路

本文编号：4047037