多吡啶钌(Ⅱ)、铱(Ⅲ)配合物合成及长循环制剂抗肿瘤活性研究
发布时间：2025-05-28 04:21
癌症一直是世界性医疗难题,高复发率和致死率使其成为难以攻克的疾病。目前的治疗方式主要有手术切除、化疗、放射治疗。近年来,越来越多的患者综合考虑各方面因素而选择化学疗法。同时,研究者们的目光也更多聚焦在化疗领域,致力于高效低毒化疗药物的探索。在多样化抗肿瘤药物蓬勃发展的今天,金属配合物被很多科学家青睐,并且取得了很多突破性成就,如顺铂、奥沙利铂等,但是在应用方面还有很多难题尚未解决。因此,寻找出具有特异性、靶向性、高效低毒的抗肿瘤药物是我们所迫切需求的。本论文合成并纯化一个系列钌（Ⅱ）配合物和三个系列铱（ⅡI）配合物,通过体外毒性评价,发现其中大部分化合物对筛选肿瘤细胞株具有一定毒性,随后对其抗肿瘤机制进行深入探究。然而其中有3个铱（ⅡI）配合物对肿瘤细胞几乎无毒,我们采用卵磷脂及功能化磷脂将其制成具有靶向性的长循环制剂。以质谱、红外、紫外、荧光、透射电镜、粒径仪、1H NMR、13C NMR等相关仪器对合成药物进行表征,并对其抗肿瘤活性及机制进行研究与讨论。本论文从以下几个方面评价所选药物的抗肿瘤活性及其机制:首先通过MTT比色法对配合物体外毒...
【文章页数】：117 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 引言
1.2 金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.1 铂金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.2 钌金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.3 铱金属配合物抗肿瘤及生物应用研究进展
1.2.4 其他金属配合物抗肿瘤研究进展
1.3 药物抗肿瘤研究方法
1.3.1 细胞死亡方式
1.3.2 药物体外细胞毒性评价
1.3.3 细胞死亡方式检测
1.4 研究目的及选题意义
第二章 以PTCP为配体的钌(Ⅱ)配合物合成及体外抗肿瘤活性机制研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂
2.2.2 实验器材
2.3 实验方法
2.3.1 1,10-菲啰啉-5,6-二酮的合成
2.3.2 配体PTCP的合成与表征
2.3.3 Cis-[Ru(phen)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.4 Cis-[Ru(dmp)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.5 Cis-[Ru(ttbpy)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.6 [Ru(phen)2(PTCP)](ClO4)2(1)的合成
2.3.7 [Ru(dmp)_2(PTCP)](ClO4_)2(2)的合成
2.3.8 [Ru(ttbpy)2(PTCP)](ClO4)2(3)的合成
2.3.9 细胞培养
2.3.10 DNA结合实验
2.3.11 分子对接实验
2.3.12 配合物的体外毒性检测
2.3.13 DNA损伤检测
2.3.14 凋亡分布及凋亡率检测
2.3.15 流式细胞仪检测线粒体膜电位
2.3.16 活性氧含量检测
2.3.17 细胞周期检测
2.3.18 侵袭效应评价
2.3.19 自噬作用研究
2.3.20 蛋白免疫印迹实验
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 DNA结合实验
2.4.2 粘度测定
2.4.3 与DNA的分子对接实验
2.4.4 配合物体外毒性检测
2.4.5 流式细胞术检测凋亡
2.4.6 DNA损伤检测
2.4.7 活性氧的分析
2.4.8 线粒体跨膜电位的检测
2.4.9 细胞周期阻滞结果
2.4.10 细胞侵袭能力的探究
2.4.11 自噬的检测
2.4.12 免疫印迹实验
2.5 小结
第三章 具有抗黑色素瘤活性的铱(Ⅲ)配合物合成及抗肿瘤机制研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 配体THPDP的合成与表征
3.3.2 Cis-[Ir(ppy)2Cl]2的合成
3.3.3 配合物[Ir(ppy)2(THPDP)]PF6(Ir-1)合成与表征
3.3.4 DAPI染色法和AO/EB双染法观察细胞凋亡
3.3.5 线粒体定位实验
3.3.6 细胞内Ca2+水平检测
3.3.7 免疫染色法检测细胞色素c的释放
3.4 实验结果及讨论
3.4.1 配合物的紫外、荧光光谱测定
3.4.2 配合物对细胞增殖的影响
3.4.3 Ir-1对B16细胞形态学影响
3.4.4 DNA损伤检测
3.4.5 Ir-1引起细胞内活性氧变化检测
3.4.6 亚细胞定位及线粒体膜电位检测
3.4.7 细胞内Ca2+水平检测
3.4.8 细胞色素c释放检测
3.4.9 Ir-1对B16细胞侵袭能力的影响
3.4.10 Ir-1对B16自噬作用的影响
3.4.11 Ir-1阻滞细胞周期在G2/M期
3.4.12 Ir-1,NAC和3-MA对caspase-3、Bcl-2家族及cleaved-PARP表达影响
3.4.13 Ir-1抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活性
3.5 小结
第四章 具有抗非小细胞肺癌活性的铱(Ⅲ)配合物合成及抗肿瘤机制研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 Cis-[Ir(bzq)2Cl]2的合成
4.3.2 Cis-[Ir(piq)2Cl]2的合成
4.3.3 配体adppz的合成与表征
4.3.4 [Ir(ppy)2(adppz)]PF6(Ir-1)的合成与表征
4.3.5 [Ir(bzq)2(adppz)]PF6(Ir-2)的合成与表征
4.3.6 [Ir(piq)2(adppz)]PF6(Ir-3)的合成与表征
4.4 结果与讨论
4.4.1 配合物的体外毒性
4.4.2 细胞凋亡结果分析
4.4.3 活性氧的定性与定量
4.4.4 线粒体膜电位的变化
4.4.5 细胞内Ca2+稳态
4.4.6 细胞色素c的释放
4.4.7 彗星实验结果
4.4.8 细胞周期分布检测结果
4.4.9 配合物抑制细胞侵袭
4.4.10 免疫印迹结果分析
4.5 小结
第五章 铱(Ⅲ)配合物合成及长循环制剂的体外、体内抗肿瘤活性研究
5.1 前言
5.2 实验材料
5.2.1 实验试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 配体及配合物合成路线
5.3.2 配体CPIP合成
5.3.3 配体DCPIP合成
5.3.4 配体TCPIP合成
5.3.5 [Ir(ppy)2(CPIP)]PF6(Ir-1)的合成与表征
5.3.6 [Ir(ppy)2(DCPIP)]PF6(Ir-2)的合成与表征
5.3.7 [Ir(ppy)2(TCPIP)]PF6(Ir-3)的合成与表征
5.3.8 负载配合物的PEG化脂质体的合成
5.3.9 脂质体的表征
5.3.10 包封率及载药量分析
5.3.11 溶酶体通透性检测
5.3.12 亚细胞定位实验
5.3.13 免疫荧光染色检测微管变化
5.3.14 体内抑瘤实验
5.4 结果与讨论
5.4.1 配合物和脂质体的紫外及荧光光谱
5.4.2 脂质体的表征
5.4.3 体外细胞毒性检测
5.4.4 Ir-Lipo的细胞内定位
5.4.5 溶酶体通透性检测
5.4.6 线粒体膜电位的改变
5.4.7 活性氧水平升高
5.4.8 彗星实验结果
5.4.9 凋亡检测结果
5.4.10 细胞周期阻滞结果
5.4.11 Ir-Lipo引起细胞自噬
5.4.12 免疫印迹实验结果
5.4.13 免疫荧光检测微管蛋白变化
5.4.14 体内抑瘤效果评价
5.5 小结
第六章 总结与展望
参考文献
致谢
硕士期间发表学术论文情况
本文编号：4048069
【文章页数】：117 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 引言
1.2 金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.1 铂金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.2 钌金属配合物抗肿瘤研究进展
1.2.3 铱金属配合物抗肿瘤及生物应用研究进展
1.2.4 其他金属配合物抗肿瘤研究进展
1.3 药物抗肿瘤研究方法
1.3.1 细胞死亡方式
1.3.2 药物体外细胞毒性评价
1.3.3 细胞死亡方式检测
1.4 研究目的及选题意义
第二章 以PTCP为配体的钌(Ⅱ)配合物合成及体外抗肿瘤活性机制研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂
2.2.2 实验器材
2.3 实验方法
2.3.1 1,10-菲啰啉-5,6-二酮的合成
2.3.2 配体PTCP的合成与表征
2.3.3 Cis-[Ru(phen)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.4 Cis-[Ru(dmp)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.5 Cis-[Ru(ttbpy)2Cl2]?2H2O的合成
2.3.6 [Ru(phen)2(PTCP)](ClO4)2(1)的合成
2.3.7 [Ru(dmp)_2(PTCP)](ClO4_)2(2)的合成
2.3.8 [Ru(ttbpy)2(PTCP)](ClO4)2(3)的合成
2.3.9 细胞培养
2.3.10 DNA结合实验
2.3.11 分子对接实验
2.3.12 配合物的体外毒性检测
2.3.13 DNA损伤检测
2.3.14 凋亡分布及凋亡率检测
2.3.15 流式细胞仪检测线粒体膜电位
2.3.16 活性氧含量检测
2.3.17 细胞周期检测
2.3.18 侵袭效应评价
2.3.19 自噬作用研究
2.3.20 蛋白免疫印迹实验
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 DNA结合实验
2.4.2 粘度测定
2.4.3 与DNA的分子对接实验
2.4.4 配合物体外毒性检测
2.4.5 流式细胞术检测凋亡
2.4.6 DNA损伤检测
2.4.7 活性氧的分析
2.4.8 线粒体跨膜电位的检测
2.4.9 细胞周期阻滞结果
2.4.10 细胞侵袭能力的探究
2.4.11 自噬的检测
2.4.12 免疫印迹实验
2.5 小结
第三章 具有抗黑色素瘤活性的铱(Ⅲ)配合物合成及抗肿瘤机制研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 配体THPDP的合成与表征
3.3.2 Cis-[Ir(ppy)2Cl]2的合成
3.3.3 配合物[Ir(ppy)2(THPDP)]PF6(Ir-1)合成与表征
3.3.4 DAPI染色法和AO/EB双染法观察细胞凋亡
3.3.5 线粒体定位实验
3.3.6 细胞内Ca2+水平检测
3.3.7 免疫染色法检测细胞色素c的释放
3.4 实验结果及讨论
3.4.1 配合物的紫外、荧光光谱测定
3.4.2 配合物对细胞增殖的影响
3.4.3 Ir-1对B16细胞形态学影响
3.4.4 DNA损伤检测
3.4.5 Ir-1引起细胞内活性氧变化检测
3.4.6 亚细胞定位及线粒体膜电位检测
3.4.7 细胞内Ca2+水平检测
3.4.8 细胞色素c释放检测
3.4.9 Ir-1对B16细胞侵袭能力的影响
3.4.10 Ir-1对B16自噬作用的影响
3.4.11 Ir-1阻滞细胞周期在G2/M期
3.4.12 Ir-1,NAC和3-MA对caspase-3、Bcl-2家族及cleaved-PARP表达影响
3.4.13 Ir-1抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活性
3.5 小结
第四章 具有抗非小细胞肺癌活性的铱(Ⅲ)配合物合成及抗肿瘤机制研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 Cis-[Ir(bzq)2Cl]2的合成
4.3.2 Cis-[Ir(piq)2Cl]2的合成
4.3.3 配体adppz的合成与表征
4.3.4 [Ir(ppy)2(adppz)]PF6(Ir-1)的合成与表征
4.3.5 [Ir(bzq)2(adppz)]PF6(Ir-2)的合成与表征
4.3.6 [Ir(piq)2(adppz)]PF6(Ir-3)的合成与表征
4.4 结果与讨论
4.4.1 配合物的体外毒性
4.4.2 细胞凋亡结果分析
4.4.3 活性氧的定性与定量
4.4.4 线粒体膜电位的变化
4.4.5 细胞内Ca2+稳态
4.4.6 细胞色素c的释放
4.4.7 彗星实验结果
4.4.8 细胞周期分布检测结果
4.4.9 配合物抑制细胞侵袭
4.4.10 免疫印迹结果分析
4.5 小结
第五章 铱(Ⅲ)配合物合成及长循环制剂的体外、体内抗肿瘤活性研究
5.1 前言
5.2 实验材料
5.2.1 实验试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 配体及配合物合成路线
5.3.2 配体CPIP合成
5.3.3 配体DCPIP合成
5.3.4 配体TCPIP合成
5.3.5 [Ir(ppy)2(CPIP)]PF6(Ir-1)的合成与表征
5.3.6 [Ir(ppy)2(DCPIP)]PF6(Ir-2)的合成与表征
5.3.7 [Ir(ppy)2(TCPIP)]PF6(Ir-3)的合成与表征
5.3.8 负载配合物的PEG化脂质体的合成
5.3.9 脂质体的表征
5.3.10 包封率及载药量分析
5.3.11 溶酶体通透性检测
5.3.12 亚细胞定位实验
5.3.13 免疫荧光染色检测微管变化
5.3.14 体内抑瘤实验
5.4 结果与讨论
5.4.1 配合物和脂质体的紫外及荧光光谱
5.4.2 脂质体的表征
5.4.3 体外细胞毒性检测
5.4.4 Ir-Lipo的细胞内定位
5.4.5 溶酶体通透性检测
5.4.6 线粒体膜电位的改变
5.4.7 活性氧水平升高
5.4.8 彗星实验结果
5.4.9 凋亡检测结果
5.4.10 细胞周期阻滞结果
5.4.11 Ir-Lipo引起细胞自噬
5.4.12 免疫印迹实验结果
5.4.13 免疫荧光检测微管蛋白变化
5.4.14 体内抑瘤效果评价
5.5 小结
第六章 总结与展望
参考文献
致谢
硕士期间发表学术论文情况
本文编号：4048069
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