6-姜酚增强VEGFa/VEGFR2结合增加血管渗透性抑制肿瘤演进

发布时间：2025-03-24 16:31

　　近些年研究表明,肿瘤血管为肿瘤细胞提供所需的营养物质与氧气,同时调节了肿瘤所处的局部微环境。抗血管治疗虽然可以抑制肿瘤生长,但已经有大量数据证明其会带来一系列负面问题,包括恶化微环境促进肿瘤演进、增加肿瘤组织内的坏死、不利于化疗药物的递送或对抗化疗和靶向药物治疗效果等。如若能够逆转肿瘤微环境的恶化,弱化对肿瘤细胞的压迫作用,则将有助于改善肿瘤恶性演进的相关行为。内皮细胞的非物理暴露或损伤,所引起的微循环肿瘤血管渗透性增加,能够减少血栓形成和肿瘤细胞转移,增加肿瘤的血流供应,有效的改善肿瘤微环境,抑制肿瘤细胞的恶性演进。当内皮细胞渗透作用增强,肿瘤组织内氧分压和营养渗透更加均匀。再通过HIF1a-VEGFa通路的反馈,降低肿瘤细胞的招募或模拟血管的生成。形态学上,会出现肿瘤血管网从多分枝、短间隔转变为少分支、间隔长的正常化微血管网。本研究中,我们筛选了具有血管调节活性的天然分子,并观察到6-姜酚,可以通过调节肿瘤血管的正常化抑制肿瘤的演进,进一步通过蛋白组学分析指向VEGFR2的激活可能是6-姜酚的直接调节靶点,生化和细胞功能研究表明6-姜酚可以调偏振性增强VEGFR2与VEGFa的结合,...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    第一节 6-姜酚简介
        1.1.1 6-姜酚研究现状
    第二节 肿瘤发生发展过程
        1.2.1 肿瘤发生的相关研究
        1.2.2 肿瘤恶性演进之路-转移
        1.2.3 肿瘤与血管生成
        1.2.4 抗肿瘤血管生成机制及耐药体系
        1.2.5 肿瘤微环境
    第三节 本课题设计背景
    第四节 实验设计方案
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 主要研究内容
第二章 实验材料与方法
    第一节 实验仪器与试剂汇总
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂登记表一
        2.1.3 实验试剂登记表二
    第二节 6-姜酚在动物水平对血管渗透性的影响
        2.2.1 实验材料
            2.2.1.1 实验对象
            2.2.1.2 溶剂配置
        2.2.2 实验方法
            2.2.2.1 6-姜酚于BALB/c鼠上的药效学研究
            2.2.2.2 6-姜酚于Tg斑马鱼上的药效学研究
    第三节 6-姜酚在细胞水平的药效学影响
        2.3.1 实验材料
            2.3.1.1 实验对象
            2.3.1.2 溶液配置
        2.3.2 实验方法
            2.3.2.1 细胞复苏、培养及冻存
            2.3.2.2 6-姜酚的IC50实验
            2.3.2.3 6-姜酚对HUVEC细胞的管道形成能力影响的实验
            2.3.2.4 6-姜酚对单层HUVEC细胞渗透性影响的实验
    第四节 6-姜酚作用机制探索
        2.4.1 实验材料
            2.4.1.1 实验对象
            2.4.1.2 VEGFR2蛋白提取
        2.4.2 实验方法
            2.4.2.1 蛋白组学评估 6-姜酚作用引起的组间蛋白差异的分析
            2.4.2.2 微量热泳动测定 6-姜酚与VEGFR2的相互作用
            2.4.2.3 Pull-Down实验测定 6-姜酚与VEGFR2的相互作用
            2.4.2.4 Biacore测定 6-姜酚与VEGFR2的相互作用
    第五节 6-姜酚作用机制验证
        2.5.1 实验材料
            2.5.1.1 实验对象
            2.5.1.2 溶液配置
        2.5.2 实验方法
            2.5.2.1 分子对接模拟 6-姜酚与VEGFR2的相互作用
            2.5.2.2 荧光染料评估 6-姜酚对细胞骨架的影响
            2.5.2.3 扫描电镜下 6-姜酚对细胞形态及渗透性影响
            2.5.2.4 Western blot
    第六节 6-姜酚作用病理学实验检测
        2.6.1 实验材料
            2.6.1.1 实验对象
            2.6.1.2 溶液配置
        2.6.2 实验方法
            2.6.2.1 组织处理
            2.6.2.2 HE染色方法
            2.6.2.3 PH探针检测肿瘤微环境方法
            2.6.2.4 免疫组织化学染色方法
第三章 实验结果与讨论
    第一节 6-姜酚通过增加微血管渗透性促进血管正常化
        3.1.1 鼠耳、鼠足及腹膜血管渗透性受不同浓度 6-姜酚影响
        3.1.2 不同浓度 6-姜酚促进单层内皮细胞渗透性
        3.1.3 不同浓度 6-姜酚促进低氧诱导的斑马鱼血管正常化
        3.1.4 不同浓度 6-姜酚促进内皮细胞管腔形成正常化
    第二节 6-姜酚可增强VEGFA与VEGFR2的激动作用
        3.2.1 蛋白质组学分析
        3.2.2 微量热泳动和Biacore实验
        3.2.3 Pull-down试验
        3.2.4 分子对接模拟 6-姜酚对VEGFa / VEGFR2作用
        3.2.5 Western Blot信号验证
        3.2.6 通过骨架形态及扫描电镜进行细胞形态评估
    第三节 6-姜酚调节VEGFR1/R2平衡改善肿瘤微环境抑制肿瘤演进
        3.3.1 6-姜酚能够有效抑制肿瘤
        3.3.2 病理切片的血管正常化评估
        3.3.3 坏死区域评价
        3.3.4 肿瘤组织微环境PH检测
        3.3.5 免疫组化染色评估 6-姜酚对相关蛋白的影响
        3.3.6 6-姜酚激动内皮细胞改善肿瘤微环境
    第四节 肿瘤微环境的改善有助于顺铂的化疗作用
    第五节 讨论
第四章 结论与展望
参考文献
致谢
个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：4037574