桑叶活性部位对2型糖尿病microRNA调控效应研究

发布时间：2025-05-29 06:05

　　目的:糖尿病是一种多病因、复杂的代谢紊乱性疾病,伴随极高的致残率和致死率,与癌症、心血管疾病并称为世界三大疾病。西药治疗虽能有效地快速的控制高血糖,但不足之处是对慢性并发症的预防和治疗仍缺乏有效措施,除此之外,连续服用口服降糖药物会出现药物失效、高胰岛素血症和胰岛素抵抗等问题。而中药因多成分、多靶点、多种作用机制等特点,从而产生一个或多个显著的整体药理作用,共同产生药效,符合糖尿病复杂的病理特点;并且具有疗效稳定、毒性小、不良反应少可长期使用等优势。近年来,在糖尿病的预防和治疗研究中甚为活跃。自古以来,历代医书都有桑叶治疗消渴症的记载,如《本草纲目》有载"桑叶乃手、足阳明之药......止消渴",日本古书《吃茶养生记》也记载桑叶有改善"饮水病"(即现代医学的糖尿病)的作用。研究已经证实,microRNA(miRNA)通过调控复杂的细胞信号通路网络和对细胞的多方面生物学行为影响,直接或者间接参与多种疾病的发生和发展进程。鉴于此,本课题从整体、细胞和基因转录后调控水平三个层面,研究桑叶对2型糖尿病胰岛β细胞功能的保护作用,并进一步探索miRNA介导细胞凋亡的相关性,从而阐明桑叶活性部位保护胰...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献研究
    1.1 2 型糖尿病的发病机制
        1.1.1 遗传因素
        1.1.2 环境因素
        1.1.3 胰岛素抵抗与胰岛素分泌缺陷
        1.1.4 其他因素
        1.1.5 总结
    1.2 β细胞损伤与2型糖尿病的关系
        1.2.1 高糖高脂
        1.2.2 氧化应激
        1.2.3 内质网应激
        1.2.4 总结
    1.3 与2型糖尿病调控效应相关的miRNA的研究进展
        1.3.1 miRNA对胰岛β细胞功能的影响
        1.3.2 miRNA调节胰岛素的释放
        1.3.3 miRNA与胰岛素抵抗
        1.3.4 总结
    1.4 桑叶与2型糖尿病的关系
        1.4.1 桑叶生物碱
        1.4.2 桑叶总多糖
        1.4.3 桑叶总黄酮
        1.4.4 总结
第二章 桑叶活性部位的制备工艺研究
    2.1 仪器与材料
        2.1.1 仪器
        2.1.2 材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 桑叶总黄酮的制备工艺研究
        2.2.2 桑叶总生物碱的制备工艺研究
        2.2.3 桑叶总多糖的制备工艺研究
    2.3 结果与分析
        2.3.1 桑叶总黄酮制备工艺的确证
        2.3.2 桑叶总生物碱制备工艺的确证
        2.3.3 桑叶总多糖制备工艺的确证
    2.4 讨论
第三章 桑叶活性部位对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞保护作用的研究
    3.1 仪器与材料
        3.1.1 仪器
        3.1.2 材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 2型糖尿病动物模型的制备
        3.2.2 实验设计和分组
        3.2.3 日常观察指标
        3.2.4 空腹血糖的测定
        3.2.5 大鼠血液样品的采集
        3.2.6 组织脏器标本的取材
        3.2.7 组织HE染色及形态学观察
        3.2.8 胰腺组织形态学电镜观察
        3.2.9 统计学处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 日常观察指标
        3.3.2 空腹血糖的测定
        3.3.3 空腹胰岛素水平的测定
        3.3.4 桑叶活性部位对T2DM大鼠组织病理形态学的改变
    3.4 讨论
        3.4.1 桑叶活性部位正常对照组设立的意义
        3.4.2 桑叶活性部位对胰岛β细胞的影响以及对2型糖尿病多靶点的改善作用
第四章 桑叶活性部位对大鼠INS-1细胞凋亡保护作用的microRNA机制研究
    4.1 仪器与材料
        4.1.1 仪器
        4.1.2 材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 INS-1细胞常规培养
        4.2.2 INS-1细胞活性检测
        4.2.3 流式细胞仪Annexin V/PI双染法分析细胞早期凋亡率
        4.2.4 荧光定量RT-PCR检测细胞Bcl-2、Bax、caspase3 mRNA的表达
        4.2.5 INS-1细胞microRNA微阵列芯片检测
        4.2.6 差异表达的microRNAs生物学分析
        4.2.7 候选靶基因KEGG生物通路富集分析
        4.2.8 候选靶基因Gene Ontology(GO)基因功能富集分析
        4.2.9 构建miRNAs与靶基因的调控网络
        4.2.10 miRNA基因芯片结果的PCR验证
    4.3 结果与分析
        4.3.1 桑叶提取物对INS-1细胞活性的影响
        4.3.2 桑叶活性部位对INS-1细胞凋亡的影响
        4.3.3 Bcl-2、Bax、caspase3基因实时荧光定量PCR检测
        4.3.4 INS-1细胞microRNA提取的质量检测
        4.3.5 桑叶活性部位干预后INS-1细胞差异miRNAs表达谱
        4.3.6 INS-1细胞基因芯片候选miRNAs的预测
        4.3.7 miRNA基因芯片结果在INS-1细胞的PCR验证
        4.3.8 miRNA基因芯片结果在T2DM大鼠胰腺组织上的PCR验证
        4.3.9 生物信息学分析
    4.4 讨论
结语与展望
参考文献
在校期间发表论文情况
统计学审核证明
致谢



本文编号：4048845