复方四君子汤免疫活性多糖的溯源研究
发布时间：2025-06-09 23:26
四君子汤为治疗脾虚证的经典方,由人参、白术、茯苓、炙甘草4味药组成。前期四君子汤药效物质基础研究表明,多糖是四君子汤物质基础的重要来源之一,且获得免疫活性多糖。为溯源活性多糖,开展如下研究:首先依据复方免疫多糖制备方法,分别分离得到2个人参均一多糖RS-3-1、RS-3-2,3个白术均一多糖BZ-3-1、BZ-3-2、BZ-3-3,1个茯苓均一多糖FL-3-1和1个甘草均一多糖GC-3-1。分子量范围在5.42×10～4-5.65×10～4 Da之间。组成单糖种类包括Rha、Ara、Xyl、Man、Glc和Gal,但各自摩尔比不同。采用经典途径抗补体及巨噬细胞RAW264.7考察多糖免疫活性。结果显示,各多糖组分和均一多糖具有抗补体活性。其中,BZ-3-1活性最高,CH50为0.482mg/mL。同时RS-3-1、BZ-3-1、FL-3-1、GC-3-1能增强巨噬细胞吞噬作用,促进其NO释放量,提高肿瘤坏死因子（TNF-α）水平（p<0.05）。采用GC-MS,红外光谱,甲基化,高碘酸氧化和Smith降解,核磁共振波谱,进一步对活性较好的均一多糖RS-3-1、...
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语说明
第一章 绪论
1 复方四君子汤研究进展
2 四君子汤多糖研究进展
2.1 四君子汤复方多糖结构研究
2.2 四君子汤复方多糖免疫活性研究
3 复方四君子汤组成各单味药的多糖研究概况
3.1 人参多糖结构及免疫作用研究
3.1.1 人参多糖结构研究
3.1.2 人参多糖免疫活性研究
3.2 白术多糖结构及免疫作用研究
3.2.1 白术多糖结构研究
3.2.2 白术多糖免疫活性研究
3.3 茯苓多糖结构及免疫作用研究
3.3.1 茯苓多糖结构研究
3.3.2 茯苓多糖活性研究
3.4 甘草多糖结构及免疫作用研究
3.4.1 甘草多糖结构研究
3.4.2 甘草多糖免疫活性研究
4 本课题研究基础与方案
4.1 研究基础:基于免疫-肠道菌群-多糖代谢物“三联效应”法筛选的四君子汤复方活性多糖研究
4.1.1 四君子汤多糖的制备与分离纯化
4.1.2 基于免疫-肠道微生物-多糖代谢物“三联效应”指标的四君子汤活性多糖的筛选
4.1.3 活性均一多糖的分离纯化与结构表征
4.2 本研究思路——四君子汤复方多糖的溯源研究
第二章 复方四君子汤组成单味药多糖的提取、分离与纯化
1 材料、试剂与仪器
1.1 药材
1.2 试剂
1.3 仪器
2 方法
2.1 试剂配制
2.2 单味药汤剂制备
2.3 单味药粗多糖制备
2.4 单味药多糖分离与纯化
2.4.1 DEAE-52阴离子交换柱分离
2.4.2 Sephadex G-100凝胶柱纯化
2.5 单味药多糖理化性质分析
2.5.1 总糖含量法测
2.5.2 糖醛酸含量测定
2.5.3 蛋白含量测定
2.6 单味药均一多糖的纯度和分子量测定
3 结果
3.1 四君子汤各单味药粗多糖的分析
3.2 四君子汤各单味药多糖的分离与纯化
3.2.1 DEAE-52柱分离结果分析
3.2.2 Sephadex G-100柱分离结果分析
3.3 均一多糖的理化性质及纯度
3.3.1 多糖均一性和分子量
3.3.2 单味药均一多糖理化性质分析
4 讨论
小结
第三章 四君子汤单味药多糖免疫活性研究
第一节 四君子汤单味药多糖的抗补体活性
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂
1.2 动物
1.3 仪器
2 方法
2.1 均一组分多糖经典途径抗补体溶血作用测定
2.1.1 溶液配制
2.1.2 临界补体浓度的确定
2.1.3 多糖样品溶血抑制率测定
3 结果
3.1 单味药多糖经典途径的抗补体活性
第二节 四君子汤单味药均一多糖对免疫细胞活性的影响
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂
1.2 细胞
1.3 仪器
2 方法
2.1 MTT法检测均一多糖对巨噬细胞生长的影响
2.2 中性红法检测多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
2.3 Griess法检测均一多糖对巨噬细胞分泌NO的影响
2.4 均一多糖对巨噬细胞产生TNF-α的影响
3 结果
3.1 均一多糖对巨噬细胞生长的影响
3.2 均一多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
3.3 均一多糖对巨噬细胞分泌NO的影响
3.4 均一多糖对巨噬细胞TNF-α生成的影响
4 讨论
小结
第四章 四君子汤单味药均一多糖的结构研究
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂2
1.2 仪器
2 方法
2.1 单糖组成测定
2.2 紫外和红外分析
2.3 高碘酸氧化和Smith降解
2.3.1 高碘酸氧化
2.3.2 Smith降解
2.4 甲基化分析
2.5 NMR分析
3 结果
3.1 单糖组成分析
3.2 UV和 FT-IR光谱分析
3.3 高碘酸氧化和Smith降解分析
3.3.1 高碘酸氧化
3.3.2 Smith降解
3.4 甲基化分析
3.5 NMR图谱分析
4 讨论
小结
总结与展望
参考文献
致谢
论文发表及撰写情况
本文编号：4049970
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语说明
第一章 绪论
1 复方四君子汤研究进展
2 四君子汤多糖研究进展
2.1 四君子汤复方多糖结构研究
2.2 四君子汤复方多糖免疫活性研究
3 复方四君子汤组成各单味药的多糖研究概况
3.1 人参多糖结构及免疫作用研究
3.1.1 人参多糖结构研究
3.1.2 人参多糖免疫活性研究
3.2 白术多糖结构及免疫作用研究
3.2.1 白术多糖结构研究
3.2.2 白术多糖免疫活性研究
3.3 茯苓多糖结构及免疫作用研究
3.3.1 茯苓多糖结构研究
3.3.2 茯苓多糖活性研究
3.4 甘草多糖结构及免疫作用研究
3.4.1 甘草多糖结构研究
3.4.2 甘草多糖免疫活性研究
4 本课题研究基础与方案
4.1 研究基础:基于免疫-肠道菌群-多糖代谢物“三联效应”法筛选的四君子汤复方活性多糖研究
4.1.1 四君子汤多糖的制备与分离纯化
4.1.2 基于免疫-肠道微生物-多糖代谢物“三联效应”指标的四君子汤活性多糖的筛选
4.1.3 活性均一多糖的分离纯化与结构表征
4.2 本研究思路——四君子汤复方多糖的溯源研究
第二章 复方四君子汤组成单味药多糖的提取、分离与纯化
1 材料、试剂与仪器
1.1 药材
1.2 试剂
1.3 仪器
2 方法
2.1 试剂配制
2.2 单味药汤剂制备
2.3 单味药粗多糖制备
2.4 单味药多糖分离与纯化
2.4.1 DEAE-52阴离子交换柱分离
2.4.2 Sephadex G-100凝胶柱纯化
2.5 单味药多糖理化性质分析
2.5.1 总糖含量法测
2.5.2 糖醛酸含量测定
2.5.3 蛋白含量测定
2.6 单味药均一多糖的纯度和分子量测定
3 结果
3.1 四君子汤各单味药粗多糖的分析
3.2 四君子汤各单味药多糖的分离与纯化
3.2.1 DEAE-52柱分离结果分析
3.2.2 Sephadex G-100柱分离结果分析
3.3 均一多糖的理化性质及纯度
3.3.1 多糖均一性和分子量
3.3.2 单味药均一多糖理化性质分析
4 讨论
小结
第三章 四君子汤单味药多糖免疫活性研究
第一节 四君子汤单味药多糖的抗补体活性
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂
1.2 动物
1.3 仪器
2 方法
2.1 均一组分多糖经典途径抗补体溶血作用测定
2.1.1 溶液配制
2.1.2 临界补体浓度的确定
2.1.3 多糖样品溶血抑制率测定
3 结果
3.1 单味药多糖经典途径的抗补体活性
第二节 四君子汤单味药均一多糖对免疫细胞活性的影响
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂
1.2 细胞
1.3 仪器
2 方法
2.1 MTT法检测均一多糖对巨噬细胞生长的影响
2.2 中性红法检测多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
2.3 Griess法检测均一多糖对巨噬细胞分泌NO的影响
2.4 均一多糖对巨噬细胞产生TNF-α的影响
3 结果
3.1 均一多糖对巨噬细胞生长的影响
3.2 均一多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
3.3 均一多糖对巨噬细胞分泌NO的影响
3.4 均一多糖对巨噬细胞TNF-α生成的影响
4 讨论
小结
第四章 四君子汤单味药均一多糖的结构研究
1 材料、试剂与仪器
1.1 试剂2
1.2 仪器
2 方法
2.1 单糖组成测定
2.2 紫外和红外分析
2.3 高碘酸氧化和Smith降解
2.3.1 高碘酸氧化
2.3.2 Smith降解
2.4 甲基化分析
2.5 NMR分析
3 结果
3.1 单糖组成分析
3.2 UV和 FT-IR光谱分析
3.3 高碘酸氧化和Smith降解分析
3.3.1 高碘酸氧化
3.3.2 Smith降解
3.4 甲基化分析
3.5 NMR图谱分析
4 讨论
小结
总结与展望
参考文献
致谢
论文发表及撰写情况
本文编号：4049970
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