AMPK通过核转录和线粒体直接结合调节肿瘤细胞线粒体功能和瓦博格效应

发布时间：2025-05-15 03:52

　　第一部分引言目前,肿瘤是世界第二大致死性疾病,其发病率和死亡率在持续增加,世界卫生组织最新数据显示,到2020年,预计全球癌症发病率将增加50%。癌症的发病机制十分复杂且尚不清楚,与基因、环境等多种因素有关。最新研究表明,能量代谢紊乱在肿瘤发生发展过程中发挥至关重要的作用,纠正肿瘤能量代谢成为肿瘤治疗的新策略。单磷酸腺苷活化蛋白激酶(5’-monophosphate adenosine activated protein kinase,AMPK)为细胞的能量感受器,近十年发现可以明显抑制肿瘤。在肿瘤细胞中,即使在有氧条件下,糖酵解途径也是其能量的主要来源,这一现象被称为Warburg效应。最新研究表明,LKB1/AMPK可以调节肿瘤的Warburg效应,但其具体机制尚不明确。线粒体是细胞的能量加工厂,所以AMPK与线粒体之间的关系密不可分。文献表明,增强线粒体的有氧氧化作用,或抑制糖酵解过程,对肿瘤细胞有明显的抑制作用,也有文献报道,AMPK可以抑制Warburg效应。因此我们推测:AMPK可以影响线粒体功能和数目。为了进一步明确其具体作用机制,我们构建了LKB1高表达细胞株A549-L...

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1部分 前言
    1.1 肿瘤发病率和死亡率
    1.2 肿瘤细胞代谢特点
    1.3 AMPK的结构和功能
    1.4 AMPK对线粒体数目的调节作用
    1.5 AMPK对线粒体功能的调节作用
    1.6 蛋白质的降解
    1.7 命题依据与假设
第2部分 AMPKα、β亚单位在肿瘤细胞线粒体中定位及其对细胞生物学行为的影响
    2.1 材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验材料
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒转化
        2.2.2 摇菌与质粒的提取
        2.2.3 细胞培养
        2.2.4 puromycin筛选浓度的确定
        2.2.5 慢病毒mito-AMPK和mito-RFP的包装
        2.2.6 慢病毒浓缩
        2.2.7 慢病毒感染A549细胞
        2.2.8 Crispr/Cas9转染
        2.2.9 蛋白样本获取
        2.2.10 蛋白浓度检测
        2.2.11 Western blot蛋白体系配制
        2.2.12 Western blot检测
        2.2.13 细胞增殖检测
        2.2.14 划痕实验
        2.2.15 平板克隆实验
        2.2.16 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 AMPKβ在细胞内的分布及对肿瘤的抑制作用
        2.3.2 线粒体上AMPKα对肿瘤的抑制作用
    2.4 讨论
第3部分 AMPKα和β对线粒体的影响
    3.1 材料
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 实验材料
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 Western blot 实验
        3.2.3 线粒体蛋白在总蛋白的比例
        3.2.4 腺病毒感染细胞
        3.2.5 总RNA提取
        3.2.6 逆转录实验
        3.2.7 总DNA提取
        3.2.8 荧光定量PCR实验
        3.2.9 线粒体活细胞染色
        3.2.10 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 AMPKα和AMPKβ对线粒体数目的影响
        3.3.2 AMPKα和AMPKβ对线粒体生物合成的影响
        3.3.3 AMPKα和AMPKβ对线粒体分裂融合的影响
    3.4 讨论
第4部分 AMPKα和β对细胞能量代谢的影响
    4.1 材料
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 实验材料
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 乳酸检测
        4.2.3 糖酵解压力检测
        4.2.4 XF24培养板细胞接种方法
        4.2.5 统计学分析
    4.3 结果
    4.4 讨论
第5部分 AMPKβ对AMPKα稳定性的影响
    5.1 材料
        5.1.1 实验细胞
        5.1.2 实验材料
        5.1.3 实验仪器
        5.1.4 实验方法
        5.1.5 统计学分析
    5.2 实验结果
    5.3 讨论
第6部分 AMPKα对肿瘤细胞体内成瘤能力的影响
    6.1 材料
        6.1.1 细胞
        6.1.2 材料
        6.1.3 实验仪器
        6.1.4 实验方法
    6.2 实验结果
    6.3 讨论
第7部分 结论与展望
    7.1 结论
    7.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4046202