蓖麻花序发育相关基因RcTAW1转基因烟草植株的特性分析

发布时间：2025-07-07 00:33

　　世界上的植物大多都是开花植物,花序发育对作物产量起着重要影响,并受很多基因控制。其中,水稻TAW1是能促进植株花序发育、形成更多花和种子的高产基因,它是ALOG基因家族成员之一,该家族在单双子叶植物中均有分布。已发现水稻TAW1在小桐子中的同源基因能够促进植物花序的发育。在此基础上,本工作分析了与小桐子同属大戟科的蓖麻中TAW1同源基因（RcTAW1）的作用并进一步探究添加融合接头对它的影响,取得的结果如下:（1）重组载体的构建以蓖麻基因组DNA为模板,利用特异性引物扩增得RcTAW1基因,然后将它克隆到pBI121背景载体中,构建植物表达载体pBI（RcTAW1）;再通过基因融合策略将自聚性Et1接头片段插入到重组载体pBI（RcTAW1）中,构建植物表达载体pBI（Et1-RcTAW1）;最后通过测序验证。生物信息学分析表明RcTAW1属于ALOG家族成员。（2）转基因植株的特性分析通过农杆菌叶盘转化法将所构建的两个植物表达载体转入烟草中,分别获得其阳性转基因烟草植株。对其T₀代转基因植株初步分析可发现花苞数确实高于野生型植株。进一步对其T₁

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【部分图文】：

图2.1 DNA和蛋白分子量标准

引物配制使用的终浓度为25pmol/μL。首先将装有需要溶解引物的离心管于4000rpm的转速情况下低速离心1min,这样可以使粘附在离心管管盖或管壁上的相关物质或者粉末沉降回管底,再加入适量分子水使其终浓度为25pmol/μL,一般情况下所加水量为管上浓度值乘以80即可。....

图3.1蓖麻基因组DNA的提取检测

首先要对蓖麻植株的叶片进行取样,准确称取0.2g左右的蓖麻叶片于备用的1.5mL离心管中,并迅速用液氮速冻起来。以用于下一步实验或-80℃保存备用。根据2.2.3.1的方法对蓖麻样品进行基因组DNA的提取,然后取1μl的DNA提取产物电泳检测,能看到较为清晰的基因组条带(图3....

图3.2 RcTAW1基因的克隆

首先通过序列比对找到水稻TAW1在蓖麻中的同源基因RcTAW1,发现它与水稻和小桐子TAW1的基因结构相似,不含内含子。根据其基因组序列设计特异性引物,以新鲜蓖麻叶片所提取的基因组总DNA为模板,采用两轮PCR进行扩增。首先利用基因编码区外围引物RcTAW1-uFw、RcTAW....

图3.3Rc TAW1片段和质粒p BI(AIT:T18.2)的酶切检测

载体pBI(AIT:T18.2)由本实验室构建。用质粒小提试剂盒提取质粒pBI(AIT:T18.2)后,并取1μL进行电泳检测(图3.3,泳道2),浓度约为40ng/μL。用SacI和XbaI进行双酶切,并对其酶切产物直接进行胶纯化,取1μL纯化产物进行电泳检测,回收产物的....

本文编号：4056213