温度和盐度对菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum)热休克蛋白家族基因表达的影响

发布时间：2025-05-10 23:27

　　本实验利用RACE-PCR技术克隆了蛤仔HSP60基因全长,结果表明,蛤仔HSP60c DNA全长1777bp(含ploy A序列),Gen Bank登录号:KT987978,包括1728bp的开放阅读框(ORF),21bp的5’端非编码区(5’-UTR)和49bp的3’端非编码区(3’-UTR),编码575个氨基酸,推导蛋白分子量(Mw)为61.25 k Da,等电点(p I)为5.04,N末端无信号肽结构,序列同源性比对发现该基因与已知的HSP60基因序列同源性较高(80%)。本研究首次成功克隆了菲律宾蛤仔的HSP60基因全长,为进一步深入研究蛤仔的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础。采用实时荧光定量PCR技术,对HSP40、60、90基因在野生及3种壳色品系(海洋橙、斑马、白蛤)蛤仔的血细胞、闭壳肌、外套膜、足、鳃和消化腺中的表达情况进行了研究。结果显示:HSP40、60、90在野生和3种壳色蛤仔不同组织均有表达。以外套膜中的表达量为对照组,其中,HSP40基因在野生和3种壳色鳃组织中表达水平最高(p<0.01),而在闭壳肌中的表达水平最低;HSP60基因在野生、海洋橙和斑马蛤血...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1蛤仔总RNA提取结果

er进行信号肽预测（http://www.c.2.0进行HSP60蛋白跨膜区分析y的ProtScale工具对预测序列的CBI和smart软件对预测序列的yHits的MotifScan工具对HSbin/PFSCAN）利用二级结构及三r/cgi-bi....

图2-2蛤仔HSP60基因3’RACE扩增产物电泳图

HSP60基因3’RACE扩增DNAMaker;1,2:蛤仔3’RAlippinarumHSP603’RACEaDNAMarker,Lane1,2:PCRpHSP60基因5’RACE扩增NAMaker;A,B:蛤仔5’RAlipp....

图2-3蛤仔HSP60基因5’RACE扩增产物电泳图

采用巢式PCR对HSP60基因的3’-和5’-末端序列进行扩增，结果如图2-2，图2-3所示，1，2号泳道为3’末端扩增产物，A，B号泳道为5’末端扩增产物。

图2-4蛤仔HSP60基因全长cDNA序列及氨基酸序列

3’RACE-PCR和5’RACE-PCR产物进行电泳检测（图2-2和图2-3），分别获得643bp的3’RACE产物和879bp的5’RACE产物，通过序列拼接，最终获得蛤仔HSP60基因cDNA全序列(图2-4)。序列分析表明，蛤仔HSP60基....

本文编号：4044485