利用RT-qPCR技术筛选菊黄东方鲀的最适内参基因

发布时间：2025-05-08 00:42

　　 定量PCR技术已经成为基因表达水平测定最常用的方法,选择合适的内参基因对基因表达水平的准确定量至关重要。本文检测了菊黄东方鲀β-actin、GAPDH、EF1-α和18S rRNA等4种内参基因在不同组织、生长环境和发育阶段中的表达,应用3种内参基因筛选软件(geNorm、NormFinder和Bestkeeper)综合分析了这4种内参基因表达的稳定性。结果表明内参基因在成鱼养殖和野生菊黄东方鲀内的稳定性排名均为:EF1-α>β-actin>18S rRNA>GAPDH;在养殖菊黄东方鲀3月龄、6月龄和12月龄三个发育阶段中内参基因EF1-α最稳定,其他各组织在不同发育阶段内参基因的选择有所差异。研究结果为不同条件下菊黄东方鲀功能基因表达的定量分析提供重要参考。

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 总RNA提取及cDNA合成
    1.3 引物设计和标准曲线的建立
    1.4 实时荧光定量PCR
    1.5 数据分析
2 结果
    2.1 总RNA和cDNA质量鉴定
    2.2 引物特异性及RT-qPCR效率
    2.3 备选内参基因的表达谱
    2.4 备选内参基因在不同发育阶段的菊黄东方鲀中稳定性分析
        2.4.1 geNorm分析
        2.4.2 NormFinder分析
        2.4.3 BestKeeper分析
        2.4.4 综合排名分析
    2.5 备选内参基因在组织中的稳定性分析
3 讨论



本文编号：4044053