Pseudoalteromonas sp. T1lg65中群体感应特性及严谨饥饿蛋白A对其影响的研究

发布时间：2025-06-26 05:44

　　群体感应（Quorum sensing,QS）是细菌通过特殊的化学信号分子进行社交的一种方式。信号分子依赖于细胞密度,扮演着细胞间通讯的媒介作用来调控细胞生理代谢活动。假交替单胞菌是一类新型的海洋细菌,其广泛存在于海洋环境中,能产生多种活性物质。越来越多的研究发现假交替单胞菌活性物质的产生受QS的调控,但假交替单胞菌QS系统及其调控机制研究尚比较缺乏。实验室前期从西门岛红树林海泥分离到一株具有QS能力的假交替单胞菌T1lg65,本论文旨在表征菌株T1lg65中Lux I/R型群体感应特性,探究严谨饥饿蛋白A（Stringent Starvation Protein A,SspA）对其调控作用。通过基因组注释发现菌株T1lg65存在一个信号分子合成酶基因lux I和信号分子受体蛋白基因lux R。基因敲除和回补实验发现:Δlux I和Δlux R丧失了产信号分子的能力,而Δlux I^c和Δlux R^c可以恢复到野生型表型,使信号分子指示菌A136显蓝色。随之将lux I在E.coli BL21中重组表达,重组大肠杆菌也能使指示菌A136变蓝。对基...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的
    1.3 研究方案(技术路线)
    1.4 预期目标
第二章 文献综述
    2.1 假交替单胞菌概述
        2.1.1 假交替单胞菌简介
        2.1.2 假交替单胞菌的生态学地位及生物功能
    2.2 群体感应
        2.2.1 群体感应概述
        2.2.2 群体感应信号分子及其类型
        2.2.3 QS系统及其类型
        2.2.4 海洋细菌中的QS
    2.3 Sigma因子RpoS
    2.4 严谨饥饿蛋白A
        2.4.1 严谨饥饿蛋白A基本概况
        2.4.2 SspA研究进展
第三章 研究内容与实验方法
    3.1 实验材料与设备
        3.1.1 实验药品
        3.1.2 实验仪器与设备
        3.1.3 菌种与质粒
        3.1.4 引物
        3.1.5 培养基
        3.1.6 药品溶液的配制
    3.2 基因敲除与回补
        3.2.1 基因组提取
        3.2.2 蔗糖敏感实验
        3.2.3 感受态的制备
        3.2.4 DNA纯化
        3.2.5 质粒提取
        3.2.6 转化
        3.2.8 菌落PCR
        3.2.9 构建敲除载体
        3.2.10 双亲接合
        3.2.11 第一轮重组子筛选
        3.2.12 第二轮重组子筛选
        3.2.13 基因回补
    3.3 异源表达信号分子合成酶
    3.4 信号分子的萃取与检测
        3.4.1 信号分子的萃取
        3.4.2 平行划线法(Cross-feeding)检测AHLs
        3.4.3 报告平板法检测AHLs
        3.4.4 薄层层析法(TLC)表征AHLs
    3.5 RNA的提取和荧光定量PCR
        3.5.1 RNA的提取
        3.5.2 荧光定量PCR
    3.6 启动子活性检测
    3.7 表型检测
        3.7.1 生长曲线的测定
第四章 结果与讨论
    4.1 菌株T1lg65中LuxI/R型 QS系统组成分析
        4.1.1 luxI的功能探究
        4.1.2 LuxI与 LuxR的互作关系
    4.2 群体感应信号分子的鉴定
        4.2.1 生物法检测信号分子产生情况
        4.2.2 薄层层析法(TLC)表征信号分子种类
    4.3 LuxI合成酶的保守性分析
    4.4 RpoS、H-NS和 SspA影响QS系统
    4.5 SspA对 QS调控途径的解析
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 创新之处
    5.3 展望
附录
参考文献
致谢
作者简介
    1 作者简历
    2 攻读硕士学位期间发表的学术论文
学位论文数据集



本文编号：4053254