乙酰肝素酶响应性仿生递药系统抗乳腺癌肺转移

发布时间：2025-06-28 02:58

　　乳腺癌严重危害女性健康,肿瘤转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。目前,化疗仍然是临床抗转移性乳腺癌的主要治疗手段,但化疗药物缺乏肿瘤靶向性,导致治疗效率不理想,并引起严重的毒副作用。肿瘤组织与正常组织存在微环境差异,肿瘤微环境具有低pH值、低氧、过表达特定的酶等为药物释放提供生物刺激,多种刺激响应性药物递送系统得以开发。据报道,乙酰肝素酶（Hpa）是哺乳动物体内唯一可以降解硫酸乙酰肝素（HS）的糖苷内切酶,Hpa在大多数肿瘤细胞中高表达,在正常组织中表达量较低。因此,HS可与化疗药物偶联形成前药,在肿瘤部位特异性释放化疗药物。然而,HS具有大量二糖单元糖醛酸及负电荷,作为外源性物质易被单核-巨噬细胞系统清除。红细胞膜具有良好的生物相容性及非免疫原性,并且红细胞膜表面具有的多种标志物蛋白可以协助纳米粒躲避单核-巨噬细胞系统清除及免疫攻击。基于上述背景,我们首先构建红细胞膜包覆的仿生纳米粒靶向递送化疗药物多西他赛（DTX）抗乳腺癌肺转移。将DTX与HS共价连接形成Hpa响应性偶联物前药HS-DTX,该前药可在中性溶液条件下自组装形成胶束。随后将红细胞膜通过挤出法包覆于胶束表面。红细胞膜包覆H...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图5.8免疫荧光法对各组小鼠肿瘤组织切片进行CRT外排检测结果(标尺为200μm)

钙网蛋白(Calreticulin,CRT)外排,即CRT从肿瘤细胞内质网转运到细胞膜上,是肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡的标志之一[15]。为考察HDNH@MC体内对免疫原性细胞死亡的影响,我们制备小鼠肿瘤组织免疫荧光切片,并采用激光共聚焦显微镜对CRT外排情况进行观察,结果见图....

图5.9(a)4T1荷瘤小鼠经不同制剂给药,肿瘤引流淋巴结中DC细胞熟化流式细胞术结果(通过CD11c+对熟化的DC细胞进行圈门)(b)4T1荷瘤小鼠经不同制剂给药,肿瘤引流淋巴结中DC细胞熟化比例。数据展示:平均值±标准差(n=3)*p<0.05

免疫荧光结果证明HDNH@MC可以有效引起肿瘤细胞CRT外排,当肿瘤细胞表面带有CRT时,其自身可作为抗原被抗原递呈细胞如DC细胞吞噬,促使DC熟化程度增加[16]。为探究HDNH@MC能否促进DC细胞熟化,采用流式细胞术对各组小鼠肿瘤引流淋巴结中DC细胞进行分析,具体结果见图5....

图5.10 4T1荷瘤小鼠经不同制剂给药,肿瘤组织内IFN-γ含量。数据展示:平均值±标准差(n=3)*p<0.05

DC熟化可以引起体内抗肿瘤免疫应答,其具体表现之一是肿瘤组织内某些细胞因子如干扰素γ(IFN-γ)分泌增加[17]。由于已经证明HDNH@MC系统可以有效引起肿瘤细胞免疫原性死亡并导致DC熟化比例增加,因此我们采用ELISA试剂盒对各组动物肿瘤组织中IFN-γ浓度进行检测。与DC....

图5.11(a)4T1荷瘤小鼠经不同制剂给药,肿瘤中CD4+和CD8+T细胞浸润流式细胞术结果(通过CD3+对T淋巴细胞进行圈门)(b-c)4T1荷瘤小鼠经不同制剂给药,单位质量肿瘤组织内CD4+(b)和CD8+T细胞(c)数量。数据展示:平均值±标准差(n=3)*p<0.05,**p<0.01

在得到上述实验结果支持的基础上,我们采用流式细胞术对各组小鼠肿瘤组织内T淋巴细胞浸润数量及种类进行检测,具体结果见图5.11。生理盐水组小鼠肿瘤组织中CD4+和CD8+T细胞浸润较少,特别是CD8+T细胞所占比例极低。接受化疗药物DTX治疗的小鼠肿瘤内CD4+和CD8+T细胞比例....

本文编号：4054314