Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析

发布时间：2025-06-06 01:20

　　 本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法,为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0. 05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察,支原体检测,Vimentin蛋白免疫荧光鉴定,测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率,核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞,消化后2～3 h即大部分贴壁并基本完全伸展,细胞呈梭形或多角形,胞浆饱满,立体感强,细胞核清晰形态良好,支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律,细胞倍增时间为24. 85 h。逆转录病毒感染效率达75. 6%,病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%,遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单,效率高,获取的细胞状态良好,细胞增殖速度快,细胞感染率高,是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段,为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验动物
    1.2 试剂
    1.3 原代豚鼠耳朵成纤维细胞的分离培养
    1.4 支原体检测
    1.5 细胞生长曲线测定
    1.6 免疫荧光
    1.7 病毒质粒转染及病毒感染
        1.7.1 磷酸钙转染法
        1.7.2 感染
    1.8 核型鉴定
    1.9 统计学方法
2 结果与分析
    2.1 豚鼠耳朵成纤维细胞的形态学观察
    2.2 豚鼠成纤维细胞生长曲线测定
    2.3 豚鼠耳朵成纤维细胞Vimentin蛋白免疫荧光鉴定结果
    2.4 豚鼠耳朵成纤维细胞的GFP病毒感染
    2.5 豚鼠核型鉴定
3 讨论



本文编号：4049572