牛囊胚两步法玻璃化冷冻管内解冻方法的优化及其原理初步分析

发布时间：2025-04-27 03:58

　　牛胚胎程序化冷冻已广泛应用于生产当中,冷冻程序较统一,技术相对成熟。玻璃化冷冻是继程序化冷冻之后发明的一种简单高效的冷冻方法,细胞无需经历缓慢的程序化降温过程,在玻璃化液中短暂处理后直接投入液氮冷冻即可。该方法不需要昂贵的程序化冷冻仪,操作省时,节约资金。牛胚胎玻璃化冷冻虽有大量的研究报道,但冷冻方案多种多样,极不统一,较大程度上限制了该方法的推广。首先,解冻程序不统一,研究者对分步解冻与一步解冻各执己见,没有提出明了的解析,让生产者无从参考：其次,细胞在玻璃化液中的处理时间不确定,预处理时间从1min至20min均有报道,玻璃化液中的处理时间从30s至3min均有采用。处理时间范围如此宽泛,不便于生产者参考。牛卵母细胞是研究抗冻保护剂渗透的理想半透膜模型,本研究以MII期牛卵母细胞为模型,从原理上分析了抗冻保护剂的添加与脱除之间的关系,以及处理时间与胞内抗冻保护剂浓度的关系。并将结论用于优化牛囊胚两步法玻璃化冷冻和管内解冻,以期简化和统一牛胚胎玻璃化冷冻方法,为指导生产提供依据。 实验结果表明： (1)用蔗糖浓度较高的玻璃化液处理牛卵母细胞后可采用较低浓度的蔗糖溶液甚至DP...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
縮略语表
第一部分 文献综述
    第一章 哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻保存研究进展
        1. 超低温冷冻保存原理
        2. 胚胎的冷冻保存
        3. 卵母细胞的冷冻保存
        4. 影响冷冻保存的因素
    第二章 牛胚胎两步法玻璃化冷冻管内解冻方法的研究进展
        1. 慢速冷冻管内解冻研究进展
        2. 玻璃化冷冻管内解冻研究进展
        3. 存在问题与展望
第二部分 实验研究
    第三章 抗冻保护剂添加、脱除与细胞的渗透压耐受性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料方法
        3. 实验结果
        4. 讨论
    第四章 牛卵母细胞在EG中的处理时间与胞内CPA浓度之间的关系
        摘要
        1. 引言
        2. 材料方法
        3. 实验结果
        4 讨论
    第五章 牛囊胚两步法玻璃化冷冻管内解冻方法的优化
        摘要
        1 引言
        2. 材料方法
        3. 实验结果
        4 讨论
结论
前景与展望
    1. 采用干冰进行长期玻璃化冷冻保存的思路
    2. 混合型抗冻保护剂的优越性
    3. 采用超纯水配制预处理液或许能达到更好的渗透效果
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：4041841