猪附红细胞体胶体金及酶标记的检测方法研究

发布时间：2025-07-06 17:10

　　猪附红细胞体病是由猪附红细胞体(M.suis)引起的人畜共患传染病,具有宿主专一性特点,常引起机体发热、贫血、黄疸等症状,给我国养猪业带来严重的隐患与危害。该病病原感染极具普遍性,且为隐性感染,临床症状与猪的许多其他疾病相似,在诊断上易误诊、漏诊,因此,对M.suis病的诊断是防控M.suis的关键。但是,目前仍缺少基层兽医人员操作方便且适用于大批量检测和普查的检测方法。ELISA检测方法和胶体金免疫层析技术方法凭借简便、快速、稳定性、灵敏度高的优点,成为目前用于动物疫病检测的主要方法,且胶体金免疫层析技术对猪M.suis抗体的检测国内外报道较少。本研究优化了IHA检测猪附红细胞体抗体的方法,建立了M.suis间接ELISA和胶体金免疫层析方法。并对这三种方法进行比较,寻求最佳检测方法。 本研究分为四个部分,1、将猪附红细胞体免疫小猪制备阳性血清,IHA效价达到1：512。2、优化IHA试验方法,确定猪附红细胞体浓度2mg/mL,37℃致敏红细胞45min,同时对402份临床样品进行检测。3、本研究建立了猪附红细胞体抗体间接ELISA检测方法。确定了最佳条件为抗原80μg每孔,4℃包...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 猪附红细胞体生物学特性
    2 猪附红细胞体致病机理
    3 猪附红细胞体病的流行情况
    4 猪附红细胞体病免疫学研究
    5 猪附红细胞体病诊断方法的研究现状
        5.1 临床诊断
        5.2 血清学诊断
        5.3 分子生物学诊断
    6 胶体金免疫层析技术的研究进展
        6.1 胶体金免疫层析技术概况
        6.2 胶体金技术原理
        6.3 胶体金层析免疫技术方法的应用
    7 研究的目的及意义
第二章 间接ELISA检测方法的建立及初步应用
    1 试剂和材料
        1.1 试剂
        1.2 材料
        1.3 试验仪器
        1.4 主要试剂的配置
    2 试验方法
        2.1 猪阳性血清的制备
        2.2 IHA条件的优化
        2.3 间接ELISA方法的建立
        2.4 间接ELISA与IHA方法比较
    3 结果
        3.1 阳性血清制备
        3.2 IHA试验条件优化
        3.3 间接ELISA的建立
        3.4 ELISA与IHA试验结果的比较
    4 讨论
第三章 猪附红细胞体胶体金检测方法的研究
    1 材料及方法
        1.1 试剂与材料
        1.2 试验仪器
        1.3 主要试剂的配置
    2 试验方法
        2.1 胶体金制备及质量鉴定
        2.2 金标蛋白的制备
        2.3 金标复合物的鉴定
        2.4 免疫层析试纸条条件的优化
        2.5 免疫层析试纸条组装
        2.6 免疫层析试纸条质量评价
    3 结果
        3.1 胶体金的制备
        3.2 金标蛋白的制备
        3.3 重悬液的选择
        3.4 离心速度的选择
        3.5 NC膜的封闭剂与封闭时间的选择
        3.6 金标垫的预处理
        3.7 质控线与检测线最佳浓度包被选择
        3.8 免疫层析试纸条组装
        3.9 免疫层析试纸条质量评价
    4 临床样品的检测
    5 讨论
结论与展望
    1 结论
        1.1 猪附红细胞体阳性血清的制备
        1.2 IHA试验条件的优化
        1.3 猪附红细胞体病ELISA方法的建立
        1.4 猪附红细胞体病胶体金免疫层析方法的建立
    2 展望
参考文献
附录缩略词
致谢
作者简历



本文编号：4056092