一种建立酒精性心肌病电生理研究模型的方法

发布时间：2025-05-13 02:07

　　 目的:通过诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)体外定向分化心肌细胞(iPSC derived cardiomyocytes,i PSC-CM)的方法建立酒精性心肌病的电生理研究模型。方法:体外扩增培养人源iPSC并定向诱导其分化为i PSC-CM。实验将iPSC-CM分为空白对照组、酒精实验组和KN93干预组。通过免疫荧光法检测iPSC-CM的分化情况,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力检测试剂盒检测i PSC-CM的功能,使用实时无标记细胞分析仪(real time cellular analysis,RTCA)监测iPSC-CM电活动的变化,采用线粒体膜电位荧光探针JC-1染色联合RTCA分析仪观察酒精对iPSC-CM的损伤而进一步验证模型。结果:与空白对照组(0 mg/mL酒精)相比,不同剂量(25,50,100,150,200,250,300 mmol/L)的酒精实验组能抑制iPSCCM的增殖,并呈剂量依赖性,差异均有统...

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【部分图文】：

图1 免疫荧光染色鉴定i PSC及iPSC-CM

此外，通过1.2.2中的方法分化获得的iPSC-CM可强阳性地表达心肌特异性标志物TNNT2和MLC2a(图1B)。光镜下，iPSC-CM可自发地呈片状、波浪样跳动，并可明显观察到肌丝肌节结构，提示已成功分化出有电生理节律的iPSC-CM。2.2基于iPSC-CM建立的酒....

图2 基于i PSC-CM建立酒精性心肌病模型

与酒精实验组相比，KN93干预组可引起LDH释放量降低，JC-1标记的红绿荧光比值上调，均证实KN93可恢复酒精对iPSC-CM的损伤(图4)，该模型可用于分子机制研究。图3酒精引起iPSC-CM坏死性凋亡

图3 酒精引起i PSC-CM坏死性凋亡

图2基于iPSC-CM建立酒精性心肌病模型图4KN93可减轻酒精引起的iPSC-CM损伤

图4 KN93可减轻酒精引起的iPSC-CM损伤

图3酒精引起iPSC-CM坏死性凋亡2.5模型应用于电生理功能研究

本文编号：4045577