肺炎链球菌pcsB组成型表达的yycF缺陷菌株的构建及其致病能力

发布时间：2025-07-05 11:01

　　 【背景】YycFG双组分系统是肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S. pn）应对外界环境的重要信息传递系统,其中表达反应调节子YycF的编码基因是肺炎链球菌生长的必需基因,但其是否调控细菌毒力尚不清楚。【目的】构建肺炎链球菌pcsB组成型表达及yycF缺陷菌,分析YycF对肺炎链球菌生物学特征和毒力的影响。【方法】采用Janus cassette （JC）反选的方法构建pcsB组成型表达菌株（Pc-PcsB⁺）,从该菌株出发用替代失活的方法构建yycF缺陷菌株（Pc-PcsB⁺DyycF）,比较野生株D39rpsl41、pcsB组成型表达株及yycF缺陷株的生长特性、荚膜多糖（capsular polysaccharide,CPS）含量、粘附侵袭能力和致病性的差异。【结果】成功构建pcsB组成型表达的yycF缺陷菌株（Pc-PcsB+DyycF）;yycF缺陷导致细菌生长缓慢、分裂异常、胞内荚膜多糖和小分子荚膜多糖增多;体外实验结果显示,yycF缺陷菌株粘附能力较Pc-PcsB⁺菌株减弱（P=...

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【部分图文】：

图1 Pc-PcsB+(35)yyc F菌株构建原理示意图

通过pcsB组成型表达构建肺炎链球菌yycF缺陷均(图1)，通过PCR重组得到mreCD-JC-Pc-pcsB/1(3404bp)和mreD-Pc-pcsB/2(1202bp)片段(图2A、B)，利用肺炎链球菌自然转化，将带同源臂的连接片段mreCD-JC-Pc-pc....

图2 PCR鉴定Pc-PcsB+菌株

图1Pc-PcsB+(35)yycF菌株构建原理示意图成功插入JC-Pc片段后，再次利用同源重组敲除JC片段(图1A)。当JC片段置换出来后，用链霉素抗性血平板筛选阳性菌株。以Pr1001、Pr1008引物进行PCR扩增，JC-Pc-PcsB+菌株扩增出3404bp大小的....

图3 PCR鉴定Pc-PcsB+(35)yyc F菌株

生长曲线结果显示，Pc-PcsB+的生长较D39rpsl41缓慢，Pc-PcsB+(35)yycF与Pc-PcsB+相比生长显著迟缓(图4A),3个菌株在血平板上的菌落形态无显著差异(图4B-D)。镜下观察细菌未染色和革兰染色标本，发现Pc-PcsB+(35)yycF有明显....

图4 D39rpsl41、Pc-PcsB+、Pc-PcsB+(35)yycF生长曲线和形态

图3PCR鉴定Pc-PcsB+(35)yycF菌株2.4D39rpsl41、Pc-PcsB+、Pc-PcsB+(35)yycF菌株中pcsB基因的转录水平和yycF上下游基因的转录水平

本文编号：4055998