小鼠羊膜干细胞改善APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠认知功能的研究

发布时间：2025-05-28 21:52

　　目的分离并培养C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜干细胞(amnion-derived stem cells, ADSCs),并探索其特性。ADSCs具有多潜能分化和自我更新的能力,并能分泌神经营养因子营养支持神经元存活。通过移植小鼠ADSCs至APPswe/PS1AE9 (PAP)双转基因模型小鼠海马内,检测PAP小鼠认知功能,明确小鼠ADSCs对PAP小鼠认知功能的影响并进行初步的机制探讨研究,为干细胞移植治疗探寻新的细胞来源,并对ADSCs治疗AD的基础研究和临床应用提供依据。方法无菌条件下机械分离C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜,并采用0.25%胰蛋白酶-EDTA的消化,应用高糖-DMEM培养基(添加10gg/L人表皮生长因子)培养。取2-4代小鼠ADSCs,免疫荧光方法检测干细胞表面标记物：性别决定区Y框蛋白(sex determining region Y box 2, SOX-2)、八聚体结合转录因子4 (octamer-binding transcripti...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
综述
    参考文献
前言
第一部分 小鼠羊膜干细胞体外分离及其特性研究
    材料与方法
        1. 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要仪器设备
            1.3 主要试剂
            1.4 主要抗体
            1.5 溶液配制
        2. 实验方法
            2.1 ADSCs分离及培养
            2.2 免疫荧光细胞染色检测细胞表面标记物
            2.3 流式细胞术检测ADSCs表面标记物
    结果
        1. ADSCs体外培养
        2. ADSCs表达干细胞表面标记物及表达神经营养因子BDNF、NGF
        3. 流式细胞术检测ADSCs表面标记物
    讨论
    小结
第二部分 ADSCs移植改善APPswe/PS1△E9小鼠认知功能的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂
            1.4 主要抗体
            1.5 主要试剂配制方法
        2. 实验方法
            2.1 转基因动物的鉴定
            2.2 ADSCs移植
            2.3 行为学检测
            2.4 小鼠脑组织取材
            2.5 脑组织海马蛋白提取、浓度鉴定
            2.6 免疫组织化学及硫黄素-S荧光染色
            2.7 ELISA检测Aβ含量
            2.8 Western blotting实验步骤
            2.9 统计方法
    结果
        1. APPswe/PS1△E9小鼠基因型的鉴定
        2. BDNF在6月龄AD模型小鼠和WT小鼠海马内分泌情况
        3. ADSCs移植并在脑内存活
        4. 行为学检测小鼠空间学习记忆能力和自主活动及焦虑状态情况
        5. 检测脑组织海马内胶质细胞激活情况
        6. 脑组织海马内BDNF、Synaptophysin蛋白水平变化
        7. 脑组织内APP、Aβ42、Aβ40及P-Tau(Thr231)蛋白水平变化
        8. ADSCs移植后小鼠脑内APPswe/PS1△E9小鼠脑内老年斑沉积情况
        9. ADSCs移植后对小鼠脑形态和结构的影响
        10. ADSCs移植后对小鼠脑内神经元的影响
    讨论
    小结
全文总结
参考文献
缩略词语
个人简介及发表文章
致谢



本文编号：4048262