高血糖所致O-GlcNAc糖基化修饰减弱胰岛素对缺血/再灌注心肌的保护作用

发布时间：2025-06-26 02:05

　　研究背景作为一种辅助治疗措施,极化液“葡萄糖-胰岛素-钾”(GIK)用于急性心肌梗死(AMI)和心脏外科手术的临床治疗已有50多年的历史,但其疗效一直存在争议。对这些临床试验的研究结果进行分析发现,GIK治疗组患者血糖显著升高可能是导致试验出现阴性结果的重要原因之一。我们实验室的研究发现,高血糖可加重大鼠和犬心肌缺血/再灌注损伤,且明显减弱GIK对缺血/再灌注心肌的保护作用。这些结果提示,良好的血糖控制是GIK临床应用的重要前提,但是高血糖减弱GIK心肌保护作用的机制尚不清楚。我们前期研究发现,胰岛素是GIK发挥心肌保护作用的关键成分;胰岛素可通过结合胰岛素受体(IR)促进胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸磷酸化,激活3-磷脂酰肌醇激酶-蛋白激酶B-内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-e NOS)途径抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡、促进心肌生存,防治迟发性心肌梗死。据此提出胰岛素直接激活细胞“生存信号(survival signal)”的细胞保护新机制。另一方面,近年的研究显示高血糖对细胞的损伤作用与葡萄糖的已糖胺生物合成通路(HBP)密切相关。尿嘧啶-5’-二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺...

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【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
实验一 高糖对胰岛素的心肌保护作用的影响及其机制：糖基化修饰的关键作用
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 方法
        2.1 乳鼠心肌原代细胞培养
        2.2 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型
        2.3 实验方案（附图）
        2.4 细胞活性的检测
        2.5 LDH活性检测
        2.6 流式细胞术检测心肌细胞凋亡率
        2.7 细胞蛋白提取及BCA蛋白定量
        2.8 Western Blot
        2.9 免疫沉淀法（IP）
        2.10 统计学处理
    3 结果
        3.1 分离的原代SD大鼠乳鼠心肌细胞
        3.2 心肌细胞生存率和LDH的释放
        3.3 心肌细胞凋亡
        3.4 心肌细胞蛋白质总O-GlcNAc糖基化修饰水平
        3.5 心肌细胞IRS-1 O-GlcNAc糖基化修饰水平
        3.6 心肌细胞IRS-1、Akt磷酸化水平
        3.7 DON抑制心肌细胞胰岛素生存信号通路的O-GlcNAc糖基化修饰
        3.8 DON对高糖减弱胰岛素心肌保护作用的影响
    4 讨论
实验二 体外循环心脏手术中高血糖对GIK心肌保护作用的影响及其机制研究
    1 材料
        1.1 实验对象
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 方法
        2.1 麻醉与体外循环
        2.2 研究分组
        2.3 心肌酶CK-MB的检测
        2.4 肌钙蛋白I（cTnI）的检测
        2.5 组织蛋白提取及BCA蛋白定量
        2.6 Western Blot
        2.7 免疫沉淀法（IP）
        2.8 统计学处理
    3 结果
        3.1 各组血糖浓度变化
        3.2 心肌酶CK-MB的水平
        3.3 肌钙蛋白cTnI的水平
        3.4 心肌组织总O-GlcNAc糖基化水平
        3.5 心肌组织IRS-1、Akt O-GlcNAc糖基化水平
        3.6 心肌组织IRS-I、Akt磷酸化水平
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：4052977