间充质干细胞对黑色素瘤细胞的抑制作用及其机制的研究

发布时间：2025-06-04 02:05

　　目的：间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一类能够从骨髓、脂肪、羊膜和牙髓等多种组织分离的干细胞。由于其具有多向分化潜能,不表达人白细胞抗原DR位点(Human leukocyte antigen-antigen D related, HLA-DR)、 CD45等细胞表面标志的低免疫原性,以及向损伤组织、肿瘤部位归巢和促进组织再生的特性,以MSCs为主的干细胞治疗有望成为肿瘤和一些自体免疫疾病的新型治疗手段。目前已证明MSCs在体内外能够分泌细胞因子,调节肿瘤细胞的相关信号通路,进而抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡。其中,NF-κB信号通路也参与了该过程,然而完整的抑制机制目前尚未见报道。起源于皮肤、黏膜和中枢神经系统的黑色素瘤中有50%的病例与BRAF基因突变有关。该基因突变的发生导致白介素-1(Interleukin-1, IL-1)持续激活NF-κB信号通路,使得黑色素瘤细胞细胞周期失控,进而导致了肿瘤的形成和发展。有研究证明MSCs能够分泌IL-1的受体拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagonist, IL-1R...

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致谢
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 黑色素瘤
    1.2 MSCs
        1.2.1 MSCs概述
        1.2.2 MSCs对肿瘤细胞的直接抑制作用机制
            1.2.2.1 MSCs通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤细胞增殖
            1.2.2.2 MSCs通过下调Akt信号通路抑制肿瘤细胞增殖
            1.2.2.3 MSCs通过分泌微泡抑制肿瘤细胞增殖
            1.2.2.4 MSCs抑制肿瘤细胞增殖的其他途径
        1.2.3 MSCs抑制肿瘤细胞增殖的间接机制
            1.2.3.1 MSCs向肿瘤归巢的机制
            1.2.3.2 MSCs免疫抑制的机制
            1.2.3.3 MSCs间接抑制肿瘤细胞增殖的机制
        1.2.4 MSCs是否抑制肿瘤细胞增殖的争议
    1.3 NF-κB信号通路,IL-1与IL-1Ra
    1.4 总结
2 实验材料
    2.1 细胞株及细胞培养所用培养基
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 细胞培养所用培养基
    2.2 主要试剂和试剂盒
    2.3 质粒和菌株
    2.4 实验动物
    2.5 主要实验仪器
    2.6 实验耗材
    2.7 主要溶液的配制
        2.7.1 核酸电泳缓冲液的配制
        2.7.2 蛋白质电泳和Western Blot所用试剂的配制
        2.7.3 细胞实验主要溶液配制
        2.7.4 其他实验溶液配制
3 实验方法
    3.1 MSCs、HEK-293细胞和A375细胞的培养
        3.1.1 MSCs的复苏
        3.1.2 MSCs的传代
        3.1.3 MSCs的冻存
        3.1.4 A375细胞和HEK-293细胞的复苏
        3.1.5 A375细胞和HEK-293细胞的传代
        3.1.6 A375细胞和HEK-293细胞的冻存
    3.2 MSCs对A375细胞增殖能力的影响
        3.2.1 MSCs与A375细胞共培养对A375的抑制效应分析
        3.2.2 MSCs CM对A375细胞的抑制效应分析
        3.2.3 MSCs CM对A375细胞周期的影响
        3.2.4 MSCs CM对NF-κB信号通路的影响
    3.3 沉默IL-1Ra表达的多克隆细胞MSCs-S和过表达IL-1Ra的多克隆细胞MSCs-O的获得
        3.3.1 IL-1Ra和GAPDH的引物设计
        3.3.2 总RNA的提取和反转录
        3.3.3 重组载体pcDNA3.1-EGFP-IL-1Ra和pGPH1-IL-1Ra的构建
        3.3.4 MSCs-S和MSCs-O的获得
        3.3.5 IL-1Ra在MSCs、MSCs-O和MSCs-S中的表达水平的检测
    3.4 MSCs-S CM和MSCs-O CM对A375细胞增殖能力的影响
        3.4.1 MSCs-S CM对A375细胞增殖的抑制效应分析
        3.4.2 MSCs-S CM对A375细胞周期的影响
        3.4.3 MSCs-O CM对A375细胞的抑制效应分析
        3.4.4 MSCs-O CM对A375细胞周期的影响
    3.5 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析及对NF-κB信号通路的影响
        3.5.1 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析
        3.5.2 MSCs-S和MSCs-O CM对NF-κB信号通路的影响
    3.6 裸鼠异位瘤实验
        3.6.1 A375细胞裸鼠异位瘤模型的建立
        3.6.2 肿瘤的组织学检测
4 结果
    4.1 MSCs对A375细胞增殖的抑制作用
        4.1.1 MSCs与A375细胞共培养对A375细胞的抑制效应分析
        4.1.2 MSCs CM对A375细胞的抑制效应分析
        4.1.3 MSCs CM对A375细胞周期的影响
        4.1.4 MSCs CM对NF-κB信号通路的影响
    4.2 MSCs对A375细胞增殖的抑制作用的机制
        4.2.1 MSCs中IL-1Ra表达水平的调节
        4.2.2 降低IL-1Ra表达水平减弱了MSCs对A375细胞增殖的抑制作用
        4.2.3 提高IL-1Ra表达水平增强了MSCs对A375细胞增殖的抑制作用
        4.2.4 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞周期的影响
        4.2.5 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析及对NF-κB信号通路的影响
    4.3 IL-1Ra表达水平对A375细胞体内增殖的影响
5 讨论
6 结论
参考文献
附录A 英文缩略词表
作者简历
学位论文数据集



本文编号：4049153