芫花酯甲抗黑色素瘤的作用及其机理的初步研究

发布时间：2025-06-04 05:46

　　研究背景 芫花酯甲由瑞香科植物芫花中提取所得，可以抑制P-388，L1210，KB等多种细胞的增殖，抑制DNA，RNA和蛋白的合成，对拓扑异构酶Ⅰ的活性具有显著的抑制作用，而对肿瘤坏死因子TNF-α，白细胞介素IL-1α和IL-1β的生物合成则并无显著影响。动物体内实验的结果表明，芫花酯甲可抑制C57BL／6和BDF₁小鼠Lewis肺癌的发展和转移。 尽管许多研究证实芫花酯甲可抑制肿瘤细胞的增殖以及肿瘤的生长，但是其具体的作用途径目前尚未阐明。为此，我们检测了芫花酯甲对黑色素瘤A375细胞增殖的影响，肯定了其对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用，并从细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡以及对蛋白激酶C（PKC）活化作用三个方面解释了其可能的作用机理，并在小鼠黑色素瘤模型上验证了芫花酯甲的抗肿瘤活性，为今后研究芫花酯甲的作用机理及将其开发成为新的抗癌药物打下基础。 研究方法 我们采用台盼蓝染料排斥实验和CCK-8分析法来检测芫花酯甲对细胞存活率的影响。通过[³H]-胸腺嘧啶掺入实验分析其对细胞DNA合成的影响。另外，对细胞进行碘化丙啶染色，...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
目录
摘要
Abstract
英文所略表
前言
试验材料
    1.细胞系及菌株
    2.细胞培养材料
    3.药品及主要生化试剂
    4.抗体
    5.试剂盒
    6.质粒
    7.动物
    8.主要仪器
    9.溶液的配制
实验方法
    1.细胞复苏与培养
    2.细胞冻存
    3.生长抑制实验
    4.CCK-8法检测芫花酯甲对细胞活力的影响
    5.³H-TdR掺入法检测芫花酯甲对细胞DNA合成的影响
    6.碘化丙啶染色流式细胞术检测芫花酯甲对细胞周期分布的影响
    7.流式细胞术测定芫花酯甲对细胞线粒体膜电势的影响
    8.磷脂酰丝氨酸外翻分析检测芫花酯甲对A375细胞的凋亡诱导作用
    9.Bradford法测定蛋白浓度
    10.电泳及相关染色
    11.Western Blot测定细胞内蛋白表达变化情况
    12.芫花酯甲对细胞内钙离子浓度的影响
    13.PKC的提取纯化以及活性测定
    14.质粒的提取、纯化及转染
    15.芫花酯甲对于PKCγ的直接激活作用
    16.建立小鼠黑色素瘤模型测定芫花酯甲对肿瘤生长的抑制作用
    17.芫花酯甲对黑色素瘤转移性的影响实验
    18.数据的处理
实验结果
    1.芫花酯甲抑制A375人黑色素瘤细胞增殖
    2.芫花酯甲对A375细胞活力的影响
    3.芫花酯甲对A375细胞DNA合成的影响
    4.芫花酯甲对A375细胞周期分布的影响
    5.Western blot检测芫花酯甲对A375细胞周期调控蛋白表达的影响
    6.磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡
    7.芫花酯甲对A375细胞线粒体膜电势的影响
    8.Western blot检测芫花酯甲对凋亡相关蛋白表达的影响
    9.芫花酯甲急性给药对细胞内钙离子浓度的影响
    10.芫花酯甲长期给药对细胞内钙离子浓度的影响
    11.芫花酯甲急性给药对细胞内蛋白激酶C活性的影响
    12.芫花酯甲对鼠脑PKC粗提物的活性影响
    13.芫花酯甲对纯化后的鼠脑PKC活性之影响
    14.芫花酯甲对γ-PKC的激活作用
    15.芫花酯甲对体内黑色素瘤的生长抑制作用
    16.芫花酯甲对黑色素瘤转移的影响
讨论
结论
参考文献
综述
    蛋白激酶Cδ与细胞凋亡
    参考文献
致谢



本文编号：4049406