PLGA/CS双层载药阳离子纳米粒治疗脑胶质瘤的研究

发布时间：2025-05-12 23:02

　　脑胶质瘤是临床发病率最高的脑肿瘤,是威胁人类健康的主要疾病之一,具有高复发率和高死亡率的特点。由于脑胶质瘤自身生长具有浸润性以及血脑屏障(BBB)的存在,使得常规的治疗方案包括手术切除、放疗或化疗均难以取得理想的治疗效果。烷化剂类抗肿瘤药物卡莫司汀(Carmustine, BCNU)通过将肿瘤细胞DNA鸟嘌呤上的第六位氧原子烷基化,促使DNA链间产生交联,从而影响DNA复制。但是由于肿瘤细胞中存在DNA修复酶,尤其是O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT),它可以将DNA鸟嘌呤上的烷基转移到自身,修复肿瘤细胞,从而导致肿瘤细胞对BCNU产生耐药性。06-苄基鸟嘌呤(O6-Benzylguanine, BG),通过直接消耗细胞中MGMT,达到有效逆转肿瘤细胞对烷化剂耐药性的作用。本课题以烷化剂BCNU为模型药物、BG为抗肿瘤增敏剂,采用可生物降解的乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和壳聚糖(CS)为纳米粒载体材料,制备核壳型双层纳米粒(PLGA/CS NPs)。以载有BCNU的PLGA为内核,分散有BG的C...

【文章页数】：125 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
第一章 BCNU与其增敏剂BG的处方前研究
    第一节 BCNU和BG的处方前研究
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 UV法确定检测波长
            2.2 BCNU和BG含量测定分析方法的建立
            2.3 考察BCNU在不同条件下的稳定性
        3 实验结果
            3.1 UV法确定检测波长
            3.2 BCNU和BG含量测定分析方法的建立
            3.3 考察BCNU在不同条件下的稳定性
    第二节 BCNU与其增敏剂BG的体外抗肿瘤活性
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
            1.3 细胞株
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 MTT法考察细胞毒性
            2.3 细胞凋亡检测
        3 实验结果
            3.1 BG细胞毒性考察
            3.2 BG给药浓度和时间对增敏作用的影响
            3.3 BCNU和BG联合给药对肿瘤细胞的细胞毒性
            3.4 细胞凋亡检测
        4 讨论
            4.1 BG增敏作用与MGMT活性、给药浓度和给药时间的关系
            4.2 BCNU的稳定性
        5 小结
第二章 (BCNU+BG)-PLGA/CS双层纳米粒的制备和表征
    1 材料和仪器
        1.1 材料和试剂
        1.2 仪器
    2 实验方法
        2.1 BCNU纳米粒的制备和工艺优化
        2.2 BCNU+BG纳米粒的制备
        2.3 纳米粒理化性质的表征
        2.4 纳米粒中BCNU和BG的测定
        2.5 载药量和包封率测定
    3 实验结果
        3.1 纳米粒中BCNU和BG的测定
        3.2 BCNU纳米粒的单因素考察和正交设计优化
        3.3 (BCNU+BG)-PLGA/CS纳米粒的包封率和载药量测定
        3.4 纳米粒形态
        3.5 纳米粒的粒径与Zeta电位
    4 讨论
        4.1 壳聚糖吸附到PLGA纳米粒表面的机理
        4.2 BCNU与BG的联合给药
    5 小结
第三章 PLGA/CS纳米粒的体外评价
    第一节 PLGA/CS载药纳米粒的体外评价
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
            1.3 细胞株
        2 实验方法
            2.1 体外释放
            2.2 体外血浆中稳定性
            2.3 溶血毒性考察
            2.4 细胞毒性考察
        3 实验结果
            3.1 体外释放
            3.2 体外血浆中稳定性
            3.3 溶血毒性考察
            3.4 细胞毒性考察
    第二节 荧光探针标记的纳米粒的制备、表征和体外研究
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
            1.3 细胞株
        2 实验方法
            2.1 香豆素6的HPLC分析方法
            2.2 香豆素6纳米粒的制备
            2.3 香豆素6作为荧光探针可行性考察
            2.4 定性考察细胞摄取
            2.5 定量考察细胞摄取
            2.6 细胞摄取机理
        3 实验结果
            3.1 香豆素6的HPLC分析方法
            3.2 香豆素6纳米粒的表征
            3.3 纳米粒中香豆素6的测定
            3.4 载药量和包封率
            3.5 香豆素6作为荧光探针可行性考察
            3.6 定性考察细胞摄取
            3.7 定量考察细胞摄取
            3.8 细胞摄取机理
        4 讨论
            4.1 (BCNU+BG)-PLGA/CS纳米粒的体外释放
            4.2 载药纳米粒的细胞毒性
            4.3 香豆素6作为荧光探针的可行性
            4.4 细胞摄取机理
        5 小结
第四章 PLGA/CS双层纳米粒的体内分布
    1 材料和仪器
        1.1 材料和试剂
        1.2 仪器
        1.3 实验动物
        1.4 细胞株
    2 实验方法
        2.1 药动学和组织分布
        2.2 血浆和组织样品中香豆素6含量分析方法的建立
        2.3 血浆和组织样品中BG含量分析方法的建立
    3 实验结果
        3.1 血浆和组织样品中香豆素6含量分析方法的建立
        3.2 血浆和组织样品中BG含量分析方法的建立
        3.3 Fischer344大鼠的体内药动学
        3.4 F98荷瘤大鼠的组织分布
    4 讨论
        4.1 影响PLGA/CS纳米粒药动学和组织分布的因素
        4.2 纳米递药系统跨越血脑屏障
    5 小结
第五章 纳米粒的药效学和安全性评价
    1 材料和仪器
        1.1 材料和试剂
        1.2 仪器
        1.3 实验动物
        1.4 细胞株
    2 实验方法
        2.1 F98荷瘤大鼠的模型建立
        2.2 原位脑胶质瘤模型的验证
        2.3 药效学和安全性评价
        2.4 F98荷瘤大鼠MRI影像学观察
        2.5 肿瘤的病理学观察
        2.6 数据统计
    3 实验结果
        3.1 原位脑胶质瘤模型的验证
        3.2 F98荷瘤大鼠体内抗肿瘤活研究
        3.3 肿瘤组织的HE染色观察
        3.4 TUNEL法检测组织水平的凋亡
    4 讨论
        4.1 F98脑胶质瘤模型
        4.2 核磁共振成像
        4.3 BCNU+BG纳米粒的抗肿瘤活性
    5 小结
全文总结
参考文献
致谢
在校期间已获成果



本文编号：4045359