不同品系Apoe -/- 小鼠颈动脉结扎后内膜增生的比较及N-乙酰半胱氨酸（NAC）的干预研究

发布时间：2025-06-06 02:29

　　目的:脑卒中是我国成年人致残的重要原因,严重影响病患的劳动能力和生活质量。颈动脉动脉硬化是缺血性脑卒中的主要原因之一,颈动脉狭窄或闭塞的介入腔内治疗短期效果良好,但动脉成形术后再狭窄或闭塞仍是目前临床治疗面临的难题。动脉内膜增生是介入治疗后再狭窄的主要病理过程,前期的研究发现载脂蛋白E敲除的小鼠高脂饮食条件下结扎颈动脉可以在短期内出现颈动脉硬化病变,病变从由巨噬细胞源性泡沫细胞组成的脂肪条纹发展到包含平滑肌细胞的纤维斑块,再发展到含有新生血管的严重管腔狭窄,在增生的动脉内膜中我们可以观察到巨噬细胞、中性粒细胞浸润和中层迁移而来的血管平滑肌细胞（VSMC）,前期的研究发现局部的炎症反应和氧化应激是影响血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响因素。C3H/HeJ（C3H）和C57BL6（B6）载脂蛋白E敲除小鼠在动脉硬化遗传易感性存在较大差异,分析这两种品系小鼠动脉内膜增生病变成分的差异有助于分析二者动脉硬化遗传易感性差异的机制。本研究首先通过比较上述两种品系小鼠高脂饮食下动脉内膜增生病变的成分差异,分析出可能影响早期动脉内膜增生的因素。然后通过干预病变巨噬细胞、中性粒细胞浸润和干预病变局部的氧化应激...

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:C57BL/6-Apoe^-/-与C3H-Apoe^-/-小鼠颈动脉结扎后动脉内膜增生的差异分析及针对炎症细胞、氧化应激的干预研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 研究对象
            2.1.2 主要仪器和试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物分组
            2.2.2 小鼠颈动脉结扎动脉硬化模型的建立
            2.2.3 小鼠颈动脉获取及形态学测量
            2.2.4 H&E染色
            2.2.5 油红O染色
            2.2.6 免疫组织化学分析
            2.2.7 ELISA检测血脂
            2.2.8 血中性粒细胞和T淋巴细胞的流式细胞学分析
            2.2.9 ELISA法检测炎症介质
            2.2.10 统计分析
    3 结果
        3.1 B6-Apoe^-/-小鼠与C3H-Apoe^-/-小鼠的空腹血脂水平
        3.2 在不干扰颈动脉血流的情况下B6-Apoe^-/-小鼠与C3H-Apoe^-/-小鼠的颈动脉动脉硬化
        3.3 B6-Apoe^-/-小鼠与C3H-Apoe^-/-小鼠颈动脉结扎后的颈动脉硬化
        3.4 B6-Apoe^-/-小鼠与C3H-Apoe^-/-小鼠内膜病变的细胞学分析
        3.5 外周血中性粒细胞和T淋巴细胞的流式细胞学分析
        3.6 抗中性粒细胞抗体干预实验
            3.6.1 抗Ly6G抗体治疗后动脉内膜增生病变形态学测量
            3.6.2 抗Ly6G抗体治疗后内膜增生病变的细胞学分析
        3.7 干扰巨噬细胞分化抗体干预实验
            3.7.1 抗CSF-1R抗体治疗实验动脉内膜增生病变形态学测量
            3.7.2 抗CSF-1R抗体治疗实验动脉内膜增生病变的细胞学分析
        3.8 抗氧化剂NAC治疗实验结果
            3.8.1 NAC治疗实验动脉内膜增生病变形态学测量
            3.8.2 NAC治疗后内膜病变的免疫组织化学分析
            3.8.3 NAC治疗后小鼠血浆炎性因子测定
    4 讨论
        4.1 遗传背景、血流对两个品系Apoe^-/-小鼠颈动脉硬化的影响
        4.2 血脂与脂质沉积对两个品系Apoe^-/-小鼠颈动脉硬化的影响
        4.3 炎症细胞对颈动脉结扎后颈动脉内膜增生的影响
        4.4 血管平滑肌细胞参与颈动脉结扎后动脉内膜病变形成
        4.5 氧化应激与颈动脉内膜增生
        4.6 血浆炎性细胞因子与颈动脉内膜增生
    5 结论
第二部分:N-乙酰半胱氨酸(NAC)通过调节氧化应激及炎症反应抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 研究对象
            2.1.2 主要仪器和试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 ox-LDL刺激血管平滑肌细胞
            2.2.2 MTT法检测血管平滑肌细胞的增殖能力
            2.2.3 划痕试验检测血管平滑肌细胞的迁移能力
            2.2.4 流式细胞学方法测量血管平滑肌ROS水平
            2.2.5 ELISA法检测细胞上清液中的MCP-1、TNF-α及 IL-10 的含量
            2.2.6 分光光度法检测血管平滑肌细胞培养液中的一氧化氮(NO)的含量
            2.2.7 统计分析
    3 结果
        3.1 NAC对血管平滑肌细胞增殖的影响
        3.2 NAC对血管平滑肌细胞迁移能力的影响
        3.3 NAC对血管平滑肌细胞氧化应激的影响
        3.4 NAC对血管平滑肌细胞分泌的炎性因子(MCP-1、TNF-α、IL-10)的影响
        3.5 NAC对血管平滑肌细胞分泌一氧化氮(NO)的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4049646